Videotube

Постовая охрана, пультовая охрана, личная охрана, сопровождение и инкассация, юридическая безопасноть

Тест ламп н7: Тест ламп ближнего света (H7)

Содержание

Тест светодиодных ламп Philips H7

Пришло время очередного теста светодиодные ламп, где мы посмотрим, как светят три линейки светодиодов Philips в цоколе H7 и сравним их по качеству и силе света.

В тесте принимали участи следующие лампы:


Стенд для тест светодиодных ламп.

Галоген мы использовали в качестве наглядной демонстрации того, что данный тип ламп уже очень сильно устарел, и если вы еще ездите на галогеновых лампах, то после данного теста наверняка задумаетесь об их замене на светодиодные.

Установленная в линзу галогеновая лампа.

Для теста мы использовали бигалогенную линзу Hella 3R Halogen, закрепленную на дощечке – такую системы мы уже использовали для своего теста ксеноновых ламп D2S, но уже с биксеноновой линзой. Лампы в линзу устанавливаются очень просто: сзади имеется защелка, которая прочно удерживает лампочку в билинзе.


Тест галогеновых ламп Philips H7

В первую очередь смотрим на светотеневую границу

галогеновых ламп Philips H7 – слабенько, но другого ничего ожидать не следовало. СТГ идет тоненькой линией, заливка плохая, свет совершенно неинтересный.

Тест силы света Philips H7.

Показатели следующие: по центру светотеневой границы 0.62 килолюкса, боковая засветка – 0.65 килолюкса. Распределение светового пучка идет плохо, поэтому ставить данные лампы в головной стоит только в крайнем случае (другое дело желтый галоген в ПТФ, но там и цоколь обычно другой). 


Тест светодиодных ламп Philips Ultinon LED H7

Установка светодиодной лампы Philips Ultinon LED H7 в галогеновую линзу.

Теперь поменяем галогенку на светодиодную лампу Philips Ultinon LED H7 – для этого потребуется открутить радиатор на лампе, установить ее аналогично галогеновой и закрутить радиатор.

Не стоит беспокоиться, что из-за своего размера лампа может не поместиться в фару, пространства для нее будет достаточно. 

Светодиодная лампа Philips Ultinon LED H7 в линзе.

Обратите внимание, что светодиодные лампы необходимо ставить вертикально, как на фото, чтобы добиться правильного света.

Тест светодиодных ламп Philips Ultinon LED H7.


Светотеневая граница намного интересней, но все равно пучок света рассеивается не очень хорошо, есть немного нижней засветке. Показатели люксметра: 1.85 килолюкса по центру, при удалении датчика в сторону сила света падает до 1.40 килолюкса, боковая засветка – 0.94 килолюкса.


Тест светодиодных ламп Philips X-Treme Ultinon H7

Установка светодиодной лампы Philips X-Treme Ultinon H7 в галогеновую линзу.

Следующей лампой в тесте будет Philips X-Treme Ultinon H7, являющейся старшей линейкой, предшествующей в нашем тесте светодиодной лампе. И тут мы сразу же видим отличную по заливке светотеневую границу, единственное, что можно было бы снизить засветку снизу и сбоку, добившись тем самым большей плотности света по центру.

Тест светодиодных ламп Philips X-Treme Ultinon H7.


Измеряем силу света: 3.25 килолюкса в центре СТГ, по мере удаления от центра сила света снижается до 1.93 килолюкса, боковая засветка – 1.83 килолюкса.


Тест светодиодных ламп Philips X-tremeUltinon LED gen2 H7

Теперь посмотрим на нашу новинку, ради которой и затевался наш тест светодиодных ламп H7.

Демонстрация конструкции светодиодной лампы Philips X-tremeUltinon LED gen2 H7.

Светодиодные лампы Philips X-tremeUltinon LED gen2 H7 сразу же порадовали нас новыми улучшенными разъемами проводки.

Установка светодиодной лампы Philips X-tremeUltinon LED gen2 H7 в галогеновую линзу.

Смотрим на светотеневую границу: практически идеал, что выражается почти в нулевой нижней засветке и слабой боковой – пучок света сконцентрирован по центру, дальний свет также хороший.

Светотеневая граница ближнего и дальнего света светодиодной лампы Philips X-tremeUltinon LED gen2 H7.

Показатели люксметра следующие: по центру 2.75 килолюкса, слева 0.82 килолюкса, справа 0.74 килолюкса. Лампа светит несколько слабей (на 0.5 килолюкса) предыдущей Philips X-Treme Ultinon, но зато мы получили более правильное распределение света, что в итоге выигрышней, нежели слегка большая яркость при увеличенной боковой засветке.

Тест светодиодных ламп Philips X-tremeUltinon LED gen2 H7.

По итогам можно сказать, что мы полностью довольны результатом теста новых светодиодных ламп Philips X-tremeUltinon LED gen2 H7. Светодиодные лампы Philips отлично зарекомендовали себя в сложных погодных условиях и, разумеется, мы рекомендуем их к установке.

Записаться на установку светодиодных ламп

В нашем автосервисе Вы можете заказать не только замену ламп, но и произвести замену или ремонт фар и отдельных элементов автомобильного освещения, а также установить парктроники или наклеить тонировочную пленку быстро, качественно и недорого – обращайтесь!

Список и стоимость выполненных работ

Тест ламп H7 — мы проверили, какие лампы лучше всего

В ходе испытаний на официальное утверждение следует проверить, что нить накала имеет правильную геометрию и что она излучает необходимое количество света. К сожалению, лампы, представленные производителем для одобрительных испытаний, могут быть (и часто) выбраны или специально изготовлены для испытаний. То, что идет на прилавки магазинов, может иметь совершенно другое качество.

Второй вопрос — эффективность лампочек на практике. Незначительные изменения в конструкции нити, которые находятся в пределах нормы, могут привести к значительному улучшению освещения дороги — в любом случае, обещают производители.

Мы проверили эффективность ламп в отражателе с эллипсоидальной линзой с хорошими параметрами и чувствительностью к качеству источника света, хотя блики для этого отражателя увеличиваются меньше после использования плохих ламп, чем в «отражающей» конструкции — в противном случае результаты могут быть хуже. Исследование проводилось в Институте автомобильного транспорта в Варшаве в рамках исследовательского проекта ITS и кампании «Просвещение» фонда «Поезжай безопасно». Примечание: мы не проверяли, соответствуют ли лампы стандартам одобрения, только то, как они освещают дорогу на практике.

Лампа является важным, но только одним из элементов фар. Та же лампочка, вставленная в другую лампу, будет освещать дорогу лучше или хуже. Это работает наоборот: хорошая фара может плохо, правильно или идеально освещать дорогу — в зависимости от используемой лампы. В исключительных случаях может случиться так, что неправильная геометрия филамента перекрывает геометрический дефект рефлектора, и эффект освещения будет правильным. Однако это редко.

Интересным фактом является качество лампочек, установленных в автомобилях на заводе (OEM). Не секрет, что производители фар для первой сборки и автомобилей предъявляют к производителям лампочек требования гораздо более строгие, чем омологация. Следовательно, «другие» лампочки, которые сходят с производственных линий и все еще отвечают требованиям по сертификации, но не настолько точны, появляются на рынке как запасные части.

Это может быть аналогично лампам накаливания с повышенной эффективностью (например, + 120%), качество которых может варьироваться в зависимости от местоположения распределения.

Покупатель лампочек не может их проверить, и, как показывают результаты нашего теста, они могут сильно отличаться, например, правильно подобранная стандартная лампочка может быть лучше, чем лампочка «среднего» типа «+ 100%».

Подробные результаты нашего теста на лампы H7 можно найти в галерее.

Проверьте цены на лампочки на Skąpiec.pl!

Bosch Xenon Silver H7 12V 55W [Sprawdź cenę]

Osram Xenarc 35W P32d-2 (D2S) [Sprawdź cenę]

LED Halogen H7 21SMD 3535 CHIP 10-30V [Sprawdź cenę]

Philips X-tremeVision h5 P43t 2 szt. [Sprawdź cenę]

Osram h5 12V 60/55W P43t Night Breaker Unlimited [Sprawdź cenę]

LED #LJ17 white h5-1210-120 [Sprawdź cenę]

Bosch Plus 90 H7 12V 55W (2 szt.) [Sprawdź cenę]

Osram standardowa żarówka halogenowa H7 [Sprawdź cenę]

Osram Night Breaker H7 [Sprawdź cenę]

Philips X-treme Vision Plus 130% h5 12V 60/55W (2 szt. ) [Sprawdź cenę]

Лучшие лампы H7 для автомобиля 2020 года: рейтинг галогеновых, ксеноновых и светодиодных моделей (топ-10) | Мой выбор

Для безопасности дорожного движения в темное время суток важно, чтобы у автомобиля было качественное освещение. Благодаря ему обеспечивается комфортная езда, хорошая видимость дороги ночью и в непогоду. Если свет подобран неправильно, возрастает риск аварийной ситуации.

Мы решили составить рейтинг, определив лучшие лампы H7 2020 года. Сравнить модели топ-10 нам помогал консультант магазина «Автоколесо» Константин Твилов.

Производители автомобильных аксессуаров предлагают большой выбор лампочек. Не зная тонкостей выбора, сложно подобрать действительно качественную модель.

В рейтинг ламп H7 вошли самые долговечные и яркие модели для ближнего и дальнего света:

Osram ULTRA LIFE H7 64210ULT-HCB 12V 55W 2 шт;
Philips Vision Plus 12972VPS2 H7 55W 2 шт;
Bosch Xenon Blue 1987301013 H7 12V 55W 1 шт;
Osram LEDriving HL H7 65210CW 14W 12/24V 2 шт;
Bosch Pure Light 1987301012 H7 12V 55W 1 шт;
Philips Diamond Vision 12972DVS2 H7 55W 2 шт;
General Electric Megalight Plus 58520MPU H7 12V 55W 2 шт;
KOITO Whitebeam III H7 P0755W 4200K 12V 55W (100W) 2 шт;
Recarver Type F H7 7000 lm 6000K RECTFLED0H7-6-2canbus 2 шт;
Vizant 4H7 H7 4300K 2 шт.

галогеновая лампа H7 для ближнего и дальнего света Osram ULTRA LIFE H7 64210ULT-HCB 12V 55W

  • гарантия – 4 года;
  • температура света – 3200К;
  • мощность – 55 Вт;
  • галогенная;
  • поток – 1500 лм.

Топ, в котором представлены лучшие галогеновые лампы H7 возглавила модель Osram ULTRA LIFE от немецкого бренда. Их ресурс в три раза больше, чем у обычных. Срок эксплуатации составляет 4 года. Подходят для фар ближнего и дальнего освещения. Мощность – 55Вт, показатель светового потока – 1550 лм, хорошо видны на дальней дистанции.

Не приносят дискомфорта зрению водителей встречных машин, лучше конкурентов светят в плохую погоду. Сделаны из термоустойчивого материала. Если вы не можете определиться, какие лампы ближнего света H7 самые лучшие, посоветуем рассмотреть эту модель.

Рекомендуется тем, кто ищет надежные, долговечные лампы для фар, с мощным ресурсом и ярким, ровным светом.

Отзывы

Водителям нравится долговечность, свет, мощность. Вблизи светят лучше, не причиняют вреда зрению встречных водителей.

Плюсы:

  • долговечность;
  • гарантия 4 года;
  • мощность;
  • белый свет.

Минусы:

  • не обнаружены.

Лучшая лампа H7 в противотуманные фары Philips Vision Plus 12972VPS2 H7 55W

  • галогеновая;
  • мощность – 55Вт;
  • теплый белый свет;
  • температура – 3250К;
  • поток – 1500 лм.

Модель входит в рейтинг ламп H7 благодаря мощному световому потоку. Способна увеличить дальность освещения. По сравнению со штатной галогеновой, светит более чем на 60% ярче. Сделана из прочного кварцевого материала, с фильтром от ультрафиолетового излучения. Крепко сидит в цоколе, не подвержена вибрациям, давлению, а также смене температурного режима.

Напряжение и мощность составляют 12v 55w. Цветовая температура – 3250 К, поток – 1500 лм. Срок службы – 400 часов. Создают равномерное освещенное дорожное полотно, теплого, белого свечения, тем самым снижают риск аварийных ситуаций.

Рекомендуется тем, кто ищет всесезонные лампочки с теплым белым светом, универсально подходящие под любые погодные условия (туман, снег, дождь).

Отзывы

Владельцы хвалят равномерность светового пучка, а также яркость. Не нравится короткий срок службы, высокая цена.

Плюсы:

  • яркость;
  • мощность;
  • универсально подходят для плохих погодных условий;
  • распределение света.

Минусы:

  • быстро изнашиваются;
  • высокая цена.

Лучшая светодиодная лампочка H7 Osram LEDriving HL H7 65210CW 14W 12/24V

  • универсальные;
  • с белым свечением;
  • яркие и мощные.

Светодиодная модель повышенной яркости. Расширенный конус света не ослеплят встречное движение. Даже на большом расстоянии обеспечивают четкую видимость объектов. Благодаря усовершенствованной технологии охлаждения, конструкция не подвержена перегревам.

Отличается универсальным дизайном, подходят для линзованных фар, штатной оптики и для всех видов автомобилей, включая минивэны и внедорожники. Эффективный дневной белый свет создает благоприятные условия в любую погоду и время суток. Мощность составляет – 14 Вт, температура – 6000К.

Рекомендована тем, кто хочет приобрести самые яркие лампы h7. Надежные, долговечные лампочки для линзованных фар.

Отзывы

Пользователям нравится легкая установка, яркость света, четкость обзора дорожного полотна и обочин. Из минусов отмечена высокая цена.

Плюсы:

  • повышенная яркость;
  • универсальность;
  • большой ресурс работы;
  • хорошо сформированная граница света и тени;
  • светодиодная.

Минусы:

Лучшая ксеноновая автолампа Bosch Xenon Blue 1987301013 H7 12V 55W

  • мощность – 55 Вт;
  • напряжение – 12 В;
  • яркие, с белым светом.

Ксеноновая лампа от фирмы Бош входит в топ благодаря ровному, контрастному освещению близкому к естественному дневному. Излучают на 50% больше света. Если такой элемент установлен на ваш автомобиль, то о видимости в плохую погоду можно не волноваться. С таким светом водители встречной полосы движения видят автомобиль на большом расстоянии.

Мощность составляет – 55 Вт, светят лучше стандартных галогеновых, при этом не напрягают зрение того, кто за рулем. На поверхность нанесено серебряное напыление, благодаря ему они незаметны в фарах.

Рекомендуется для автолюбителей, предпочитающих ксеноновый свет, не ослепляющий встречные машины, обладающий ровным световым пучком.

Отзывы

Владельцы хвалят ксенон h7 за качественное освещение пути в условиях недостаточной видимости. Нравится длительный срок службы, приятное глазу свечение. Существенных минусов нет.

Плюсы:

  • яркость;
  • ровный пучок;
  • хорошее освещение дороги;
  • не слепят встречный поток;
  • долгий срок службы.

Минусы:

Как выбрать автомобильную лампу H7

От головного освещения зависит безопасность на дороге. Если фары светят плохо, то водитель может не заметить пешехода или попасть в авариную ситуацию. Чтобы такого не возникло, важно правильно выбрать световой элемент для передних фар. Лампы H7 с мощным потоком света хорошо освещают при этом не ослепляют встречные автомобили.

Выбор должен основываться на интенсивности светового потока, комфортного для зрения, а также сроке службы. Перед приобретением лампы, важно знать какие подходят для вашего автомобиля.

Они бывают галогенные, светодиодные, ксеноновые, все модели имеют преимущества и недостатки, с которыми нужно ознакомиться перед покупкой:

  • Галогеновые – простые в установке в фары и использовании, но имеют короткий срок службы, подвержены перегревам. Колба выполнена из кварцевого стекла, со специальным газом и нитью накаливания.
  • Ксеноновые устойчивы к вибрациям, перегревам, но дорого стоят, а для работы требуют дополнительной установки устройств.
  • Светодиодные – led лампы h7 экономичны, интенсивно освещают, тест сравнение с элементами накаливания показал, что они не дают стабильный световой пучок. Такие элементы обеспечивают освещение только в определенном ракурсе.

Перед тем, как выбрать автомобильную лампу H7, необходимо обратить внимание на параметры, характеризующие осветительные приборы:

  • долговечность;
  • стоимость;
  • яркость светового потока;
  • комфортность освещения.

В рейтинг производителей автоламп H7 входят: Osram, Philips, Bosch, General Electric, KOITO Whitebeam, Recarver, Vizant.

Технические особенности лампочек

Галогеновая лампочка Bosch Pure Light 1987301012 H7 12V 55W

Фирма Бош занимает лидирующее место среди надежных производителей. Эта модель входит в топ-10 благодаря интенсивному освещению дороги и объектов на большом расстоянии. Цветовая температура составляет – 3200 К. Обеспечивает качественное обозрение в условиях пониженной видимости, водитель может точно сфокусироваться и не потерять бдительность при аварийной ситуации.

Эффективно освещает близлежащие дорожные пути. Мощность составляет – 55 Вт, светит дневным белым светом, комфортным для зрения. Одни из лучших галогеновых ламп H7 на рынке с хорошим соотношением цена-качество.

Рекомендуется тем, кто ищет недорогую, долговечную лампочку белого свечения.

Отзывы

Владельцам нравится цена галогенки, яркий свет спектр освещения и светопередача. Обеспечивает хорошую видимость во время дождя и снега. Существенных минусов не выявлено.

Плюсы:

  • эффективное освещение;
  • белое свечение, близкое к дневному;
  • не ослепляет встречные автомобили;
  • соотношение цена-качество.

Минусы:

Лампы белого свечения Philips Diamond Vision 12972DVS2 H7 55W для линзованной оптики

В обзор лучших ламп H7 вошел галогеновый комплект со сроком работы в 400 часов, обеспечивающий интенсивную светопередачу. Равномерно и эффективно распределяют свет по главному дорожному полотну и соседним полосам. С их помощью водитель может объективно оценивать обстановку на дороге.

Цоколь PX26d отличается низкой температурой, защищен от перегревов, не подвергает плавлению пластик на фарах. Колба сделана из закаленного стекла, обладающего повышенной прочностью и стойкостью. Показатель светового потока – 950 лм, а температура – 5000 К, эти параметры обеспечивают приближение к дневному свету. Не слеплит встречных водителей, сохраняет обзор в плохую погоду.

Рекомендуется водителям, которые в поисках качественных, долговечных ламп с цоколем H7, обеспечивающих яркое освещение в условиях плохого обозрения.

Отзывы

Пользователям нравится оттенок свечения, равномерность и яркость светового пучка, подходят для линзованной оптики. Из недостатков отмечено, что свет отливает желтизной, срок работы около 9 месяцев.

Плюсы:

  • яркие;
  • с высоким световым показателем;
  • совместимы с фарами, имеющими линзу в конструкции;
  • равномерная яркость всего светового пучка;
  • подходят для непогоды.

Минусы:

  • отливают желтым оттенком.

General Electric Megalight Plus 58520MPU H7 12V 55W для противотуманных фар

Галогеновая лампочка для автомобиля светит ярче стандартного головного освещения. Дает хороший свет в дождливую погоду, рассеивает лучи по влажному асфальту на большое расстояние. Цветовая температура – 3500 К, напряжение и мощность – 12 В и 55 Вт. Эффективно освещают дорожное полотно ночью, с ними водитель чувствует себя в безопасности во время движения.

Не бликуют, не ослепляют встречных водителей. Лампы предназначены для противотуманок, а также для ближнего и дальнего света. Практически не нагреваются. В упаковке идет комплект из двух штук. Оптимальное соотношение стоимости и предложенных параметров.

Рекомендуется тем, кто ищет надежные, энергоэффективные лампочки для фар с правильным светораспределением и сбалансированной цветовой температурой.

Отзывы

Световые элементы нравятся за яркое освещение дороги и приятный глазу оттенок света. Существенных минусов не выявлено.

Плюсы:

  • мощные;
  • не подвержены перегерву;
  • хорошо показывают себя ночью;
  • подходят для использования в ПТФ;
  • универсальная цветовая температура;
  • не доставляют дискомфорта встречным водителям.

Минусы:

KOITO Whitebeam III H7 P0755W 4200K 12V 55W (100W) повышенной яркости

Японская фирма KOITO занимает лидирующее место среди производителей оптики и осветительных элементов для транспортных средств. Эта модель с повышенным уровнем яркости и способностью создавать видимость в тумане и при осадках. Мощность стандартная, составляет – 55 Вт, цветовая температура достигает – 4200 К, не подвержены перегревам.

Оттенок свечения – белый. Эффективно освещает дорогу и обочины, совместима со многими марками автомобилей. С точным фокусом светового потока и стабильной работой при высоких температурах. В упаковке комплект из двух штук.

Рекомендуется тем, кто хочет яркие лампы для авто с холодным белым свечением, надежные, простые в установке и эксплуатации.

Отзывы

Пользователям нравится стабильная работа, ближний свет светит лучше. Плюсом является интенсивность светового потока. Из минусов отмечена недолговечность.

Плюсы:

  • высокая цветовая температура;
  • термоустойчивость;
  • яркое освещение;
  • правильная геометрия светового пучка.

Минусы:

  • недолговечны.

Самая яркая светодиодная led-лампа Recarver Type F H7 7000 lm 6000K RECTFLED0H7-6-2canbus

Модель относится к осветительным элементам с высокой яркостью света. Значение светового потока составляет – 7000 лм при мощности 24 Вт. Способна светить на дальние расстояния с точным направлением пучка света. Оснащена защитой IP68, не подвергается воздействию влаги и других неблагоприятных факторов, выполнена из качественных материалов. Благодаря пластичному ленточному радиатору, износоустойчива и долговечна.

В конструкции есть обманка, которая убирает ошибки компьютера. Показатель цветовой температуры составляет 6000 К. Если выбираете, какие лампы H7 лучше светят в дождь, то обратите внимание на эту марку. Обеспечивает хороший обзор опасных участков, а также видимость в туман и снегопад. Помогают водителю лучше ориентироваться за рулем, а также избегать аварийных ситуаций, связанных с плохой видимостью.

Рекомендуется тем, кто ищет долговечные приборы для освещения дороги, отвечающие стандартам качества.

Отзывы

Владельцы довольны стабильной работой, яркостью и белым оттенком света. Из недостатков отмечают высокую цену.

Плюсы:

  • высокий показатель яркости;
  • устойчивость к вибрациям;
  • универсальная световая температура;
  • подходит для плохих погодных условий;
  • большой срок службы.

Минусы:

  • завышенная стоимость.

Ксеноновая Vizant 4H7 H7 4300K

Главное преимущество ксенона заключается в том, что такие световые элементы не подвержены перегоранию. Они не имеют нити накаливания, при этом светят ярко и продолжительно. По интенсивности света это самые мощные лампочки H7 в обзоре. При правильном использовании осветительные приборы прослужат более трех лет. Эта модель обладает правильной геометрией светового пучка с температурой в 4300 К.

Лампы не подвергаются вибрациям, ударам. Совместимы с большинством российских автомобилей (можно поставить в Приору). Показатель светового потока – 2800/3000 лм. Имеет теплый, белый свет, не ослепляющий встречных водителей. Экономно расходуют энергию, с хорошим сроком годности. Комплект состоит из двух штук.

Рекомендуется тем, кто ищет долговечные, яркие лампы, отличающиеся стабильностью, надежностью и равномерным свечением.

Отзывы

Автолюбители хвалят ксеноновые световые элементы за дальность светового потока, приятный глазу оттенок света, высокий уровень цветности. Существенных минусов не выявлено.

Плюсы:

  • одни из самых ярких;
  • высокая температура светового пучка;
  • не подвержены вибрациям;
  • экономичны;
  • хорошее соотношение цена-качество.

Минусы:

Заключение

Автомобильные лампы в цоколе H7 – наиболее распространенная модель среди автолюбителей. Они подходят для четырехфазной осветительной системы. Классические образцы галогенок более популярны и распространены. Они увеличивают зону освещения перед машиной, обладают повышенной яркостью при этом бюджетные. Заменить штатное освещение можно не только галогеновыми, но и ксеноновыми, а также светодиодными лампочками.

Перед тем, как приобрести определенную модель лампы Н7, необходимо точно понимать, в каких условиях она будет эксплуатироваться. Если предполагается часто использовать автомобиль в туман или снег, то выбирайте модели с температурой света 3000 кельвинов. Если требуется универсальное решение, то хорошо подойдут лампы с температурой 3500–4000 кельвинов.

Какую модель рейтинга ламп H7 выбрать, решает водитель, важно помнить, что именно правильный свет помогает быстро фокусироваться при плохой видимости. А также благодаря хорошему освещению можно вовремя избежать столкновения с пешеходом или встречным автомобилем.

В нашем рейтинге присутствуют световые элементы для фар ближнего и дальнего света от ведущих мировых производителей. Они отличаются качеством, долговечностью, обеспечивают обзор на дороге, эффективно освещают обочины, а также далеко расположенные объекты.

Лидерами топ-10 стали модели от лучших производителей автомобильных ламп:

Osram ULTRA LIFE 64210ULT-HCB 12V 55W. Модель от немецкой компании, выпускающей оптику для транспортных средств. Эта мощная галогеновая лампа не подвержена вибрациям, с продолжительным сроком службы.
Philips Vision Plus 12972VPS2 H7 55W – световой элемент от нидерландского производителя. Качественные, ярко освещают дорогу в непогоду.
Bosch Xenon Blue 1987301013 H7 12V 55W. Лампочки от немецкой фирмы, регулярно обновляющей линейку оптики, а также совершенствующей технологии. Ксеноновые лампы яркие, простые в установки, не слепят встречных водителей, долговечные.
Osram LEDriving HL 65210CW 14W 12/24V – светодиодные световые элементы, обеспечивающие четкую видимость, универсально подходят для линзованной оптики.

Для конкретной ситуации может оптимально подойти совсем другая модель ламп Н7, не представленная в списке лидеров нашего обзора. Все модели рейтинга отличаются высоким качеством и заслуживают внимания.

Тест светодиодных ламп H7 CL6 в фаре

Многие из вас насмотрелись различных обзоров на ютубе, где рассказывают про автолампы купленные у китайцев. Обычно расскажут про упаковку, внешний вид, направят на стену, дорогу или кусты. Тест на ослепление встречных водителей чаще всего очень простой, если  встречные не мигают дальним светом, то значит всё нормально, можно эксплуатировать. Таким экспериментаторам сами знаете, куда надо эти лампы засунуть, чтобы светились от счастья.

Содержание

  • 1. Светодиодные лампы H7 CL6
  • 2. Условия тестирования
  • 3. Измерения в рефлекторной фаре
  • 4. Цветовая температура
  • 5. Светотеневая граница
  • 6. Распределение света
  • 7. Результаты

Где купить?

Приобрести лампы можно только в магазине Cool-Led.ru
www.cool-led.ru/products/komplekt-svetodiodnykh-lamp-cl6-tsokol-h7
в других они не продаются, потому что производителем является этот магазин.

Получите скидку 3%, указав скидочный купон «ledobzor»

Светодиодные лампы H7 CL6

Предварительно смотрите полный обзор светодиодных ламп H7 CL6.

В тестировании будут участвовать автомобильные светодиодные лампы с цоколем H7, модель CL6. Образцы предоставлены интернет магазином  http://cool-led.ru , в других они не продаются, потому что производителем является этот магазин.
Получите скидку 3%, указав скидочный купон «ledobzor»

В качестве эталона выступает новая галогенная лампочка Osram H7 12V 55W, которая устанавливается в качестве штатных на заводе.

 Osram H7 55W  LED CL6
Световой поток 1500лм 2214лм эквивалент
Мощность 55W 20W
Цветовая температура 3000К 5000К

Условия тестирования

В качестве эталона будет выступать свет от галогенки, с ней и будем проводить тестирование. Для измерений используем фару от Renault Duster и линзу с цоколем H7.

Световое пятно от разных источников имеет и разную форму, поэтому для сравнения ксенона, галогена и на диодах есть специальный ГОСТ Р 41.112-2005
На изображениях наглядно показаны расположение точек измерения на дороге и с места водителя по этому ГОСТу.

Как вы понимаете, без приличного оборудования и ничего сказать про лампочки нельзя. Но есть более продвинутые обзорщики, например Андрей Финашин, которые пытаются сравнивать различные образцы не приборе для настройки фар (реглоскопе). Но сравнивать LED, галогенные, ксеноновые источники на реглоскопе бессмысленно, потому что он измеряет освещенность только в 2 точках.  Обычно одна, это осевая сила света, и вторая на оптической оси фары.

Измерения в рефлекторной фаре

Образец устанавливается в фару  от Рено Дастер. Точки, по которым будет проводится замер, полностью регламентированы в  ГОСТ Р 41.112-2005
По замерам мы видим улучшение освещенности на 180-200% по сравнению с галогеновой. Ослепление встречного отсутствует, это отличный показатель, самый лучший из всех протестированных LED автоламп. Данный образец CL6 отлично работает в любой рефлекторной фаре, поэтому очень рекомендую к покупке, такие результаты встречаются очень редко.

Наименование Галоген,
люкс
CL6 H7, эквивалент
люкс
Разница в %
B50L 1,15 2,38 +206%
50L 11,4 26,6 +233%
50V 32,3 57,9 +179%
50R 38,7 77,7 +200%
75R 30,3 41,8 +138%
Осевая сила 33,5 80,8 +270%
Уточнение, разница показывает, насколько CL6 H7 лучше галогена

Эквивалент освещенности указан с учетом цветовой температуры 5000К, которую глаз воспринимает лучше галогена на 3200К.

После установки светодиодной лампы ближнего света требуется настройка угла наклона фары. Это необходимо делать и для галогена, особенно китайского.

Цветовая температура

..

Цветовая температура 5000К является оптимальной, это нейтрально белый  без голубого оттенка. Особенно оттенок видно, когда одновременно в головные фары установлены галогенные и led автолампы.

В темное время суток максимальная чувствительность глаза меняется с 555нм на 507нм. То есть чувствительность в нейтрально-белом диапазоне возрастает, а в теплом падает. Поэтому при одинаковом количестве люмен нейтрально белый  на 5000К даст видимость объектов лучше, чем 3000К галогена. Разница составит примерно 60-65%, за счет этого улучшается видимость.

Светотеневая граница

Визуально проверим светотеневую границу (СТГ). Какая она не была бы хорошая, главное показатель ослепления встречных автомобилей. СТГ достаточно на всех фото ровная, без засветов.

Распределение света

Результаты

При эквиваленте яркости в 2214 люмен тестируемая светодиодная лампа CL6 с цоколем H7 в фаре Рено Дастер показывает отличные результаты. В контрольных 50R и 75R получили в среднем увеличение освещенности на 200% и 138% соответственно. При этом ослепление встречного транспорта самое минимальное, которое встречал на тестах 17 LED автоламп. У плохих автоламп ослепление в 30-50 раз выше, и это можно выяснить только после тестов. Можете смело покупать CL6 H7, имитация нити накала галогенки позволяет правильно работать в рефлекторе, другим лампочкам далеко до таких показателей.

Так же читайте первую часть обзор светодиодных ламп H7 CL6.

Где купить?

Приобрести лампы можно только в магазине Cool-Led.ru, в других могут продаваться похожие, но они гораздо хуже по техническим характеристикам

Покупать тут www.cool-led.ru/products/komplekt-svetodiodnykh-lamp-cl6-tsokol-h7
в других они не продаются, потому что производителем является этот магазин.
Получите скидку 3%, указав скидочный купон «ledobzor»

Тест автомобильных ламп H7, H5 и h2

Хорошему автомобилю нужен хороший фонарь под каждый глаз. Да так чтоб светил, что можно было светлое будущее увидеть. Тест ламп, проведенный авторитетными экспертами, установил лучшие модели для фонарей вашего автомобиля.

Типы автомобильных ламп

Для правильного подбора ламп на автомобильную оптику нужно знать основные их типы. А также особенности конструкции каждого из них.

В основу международной классификации автомобильных ламп положена буквенная и цифровая маркировка. Буква в маркировке модели обозначает тип конструкции цоколя.

Автомобильные лампы и их маркировка

Для крепежа лампы в фаре применяют различные системы. В последние годы резьбовая система крепежа в автомобилестроении практически не применяется. Связано это с тем, что цокольная часть является наиболее уязвимой. Резьбовая система крепления не является оптимальным вариантом. На смену ей приходят эффективные конструктивные решения, обладающие большей сопротивляемостью к действию механических и физических факторов (тряска, вибрация, удар, перепады температур). Многие из этих крепежных конструкций перекочевали из экстремальных видов автоспорта.

h2

Наиболее распространенный тип. Чаще всего применяется в четырехфарной системе освещения. Конструкция таких устройств накаливания состоит из одной спирали. Тип h2 относится к фланцевым видам, характеризующихся жестким параметром расположения спирали по отношению к фланцу. Благодаря чему обеспечивается оптимальная фокусировка относительно оптики и отражающей зеркальной поверхности.

Автомобильные лампы h2, применяемые в фарах головного света и противотуманках, имеют вытянутую или скрученную спираль. Цоколь h2 чаще всего применяется в моделях для противотуманных фар и дополнительных огней.

Галогенная противотуманка с цоколем h2

В зависимости от применяемой технологии лампы h2 можно разделить на такие основные группы:

  • Накаливания – устроены по принципу обычной бытовой лампочки.
  • Галогенные – такие модели h2 устроены, как и обычные лампы накаливания. Но вместо вакуума в них закачивают смесь инертного газа и галогенового вещества (пары йода или брома). Колпак устройства выполняется из кварцевого стекла, что значительно увеличивает ударостойкость ламп. На сегодня галогенные модели h2 самые распространенные на нашем рынке.
  • На основе светодиодов – передовая технология. В таких устройствах h2 используются полупроводниковые кристаллы. Светодиодные модели наиболее устойчивы к механическим воздействиям. Использовать светодиоды в автомобильной оптике начали относительно недавно. Поэтому они еще не получили широкого распространения.
  • Ксеноновые лампы – в них для получения света используется электрическая дуга между двумя металлическими электродами, расположенными в ксеноновой среде. Для запуска таких устройств нужен специальный блок. Поэтому ксеноновые модели самые дорогие из всех.

h5

Автомобильные лампы с цоколем h5 используются в основном в фарах головной оптики. Конструкция ламп h5 включает в себя две спирали. Основные виды этого типа устройств:

  • Галогенки.
  • Светодиодные модели.
  • На ксеноне.

Наиболее распространены галогенки h5. Их модификации:

  • Модели с увеличенным термином эксплуатации – срок их службы в несколько раз больше обычной h5.
  • Лампы h5 повышенной световой мощности – продуцируют световой поток, который на 30% ярче обычного.
  • Всепогодные – продуцируют свет желтоватого цвета.
  • С повышенной энергетической мощностью – используются во внедорожной светооптике.

H7

Относится к фланцевому типу однонитевых автомобильных ламп. H7 производятся сравнительно недавно (середина 90-х).

Основные виды H7:

  • Галогенные модели H7.
  • Светодиодные модели.
  • H7 на основе ксенона.

Такой тип используется в основном в фонарях головного света. На рынке доступны модели H7 с повышенной мощностью и светоотдачей.

Лучшие модели

В рейтинг ламп для легкового автомобиля вошли самые лучшие модели устройств различных типов. Отбор производился не только по уровню популярности среди российских автомобилистов, но и по результатам испытаний авторитетных печатных изданий автомобильной тематики.

OSRAM h5 Standard

Характеристики модели, открывающей рейтинг:

  • Тип — h5.
  • Лампы основного света.
  • 12 В.
  • 60-55 Вт.

OSRAM h5 Standard — отлично подходит как для города, так и для трассы

Тест модели показал, что степень освещения верхней границы намного ниже установленной нормы. То есть она полностью безопасна для других участников дорожного движения (не ослепляет).

Освещение лампой рабочей зоны оказалось наиболее эффективных из всех представленных образцов. По всех границе освещения слепых зон или темных пятен не выявлено.

Модель подходит как для городского цикла движения автомобиля, так и для движения по трассе.

GENERAL ELECTRIC h5 Standard

  • h5.
  • Для основного света.
  • 12 В.
  • 60-55 Вт.

Тест показал, что автомобильная лампа освещает рабочую зону равномерно с двух сторон. Что для правостороннего движения не является идеальным показателем.

Уровень верхней границы светового потока ниже допустимого. Слепых зон или пятен затемнения в зоне основного фокуса обнаружено не было.

Philips Vision +50% Plus

  • H7.
  • С повышенным уровнем освещения.
  • 12 В.
  • 60-55 Вт.

Лампа Philips Vision +50% Plus

Освещенность рабочей области без слепых зон. Верхняя граница луча в пределах допустимой высоты. Тест мощности освещения показал, что световой поток выше установленной нормы всего на 10-12%, что намного ниже заявленного производителем уровня (50%).

OSRAM

  • H7.
  • Для основного света.
  • 12 В.
  • 60-55 Вт.

Тест освещения рабочей зоны модель прошла. Предел высоты луча в норме. Мощность освещения немного ниже минимального, что в условиях ограниченной видимости (дождь, снег туман) является критичным показателем.

OSRAM рекомендуется для использования в городских условиях и трассе только при достаточной видимости.

Philips X-Treme Vision  + 100%

  • Тип – h2 галогенка.
  • Для основного света.
  • 12 В.
  • 55 Вт.

Philips X-Treme Vision  + 100% — обеспечивают мощный световой луч

Специальная серия. Заявлена производителем как модель автомобильных ламп, рассчитанной для самых экстремальных дорожных условиях. Благодаря использованию галогенной технологии удалось в 2 раза увеличить мощность светового луча.

Тест возможностей модели показал, что она обладает повышенным уровнем освещения. Что при использовании ее в режиме дальнего света на крутых дорожных уклонах негативно влияет на безопасность передвижения других автомобилистов (может ослепить).

BOSCH h2 5000K

Характеристики модели, которая замыкает наш рейтинг:

  • h2, ксеноновая.
  • Для основного света.
  • Пусковой блок на 35 В.
  • 35 Вт.

Заявленный производителем ресурс лампы составляет 2 000 часов. При этом уровень мощности светового луча на 200% выше обычной.

Тест возможностей модели подтвердил заявленную мощность луча и потребление энергии на уровне 35 Вт. Тем не менее, вызывает опасение столь высокая мощность луча, которая может быть опасной для остальных участников автомобильного движения.

Видео о преимуществах и недостатках галогенных лампы с цоколем h5

Итоги

Из всех рассмотренных типов очевидным преимуществом в ценовом и ресурсном эквиваленте обладают галогенные модели h2. Но только при условии грамотного использования галогенок на крутых дорожных уклонах в режиме дальнего света.

Какие лампы ближнего света H7 самые лучшие

От ламп ближнего света, во многом, зависит безопасность водителя на дороге. Слишком яркий свет способен ослепить других участников дорожного движения и стать причиной аварии. Для того, чтобы не попасть в такую неприятную ситуацию, необходимо правильно подобрать лампочки ближнего света. Наиболее распространёнными являются лампы с цоколем h7.

Как правильно их выбрать? Об этом и расскажет данный материал.

Требования к лампам ближнего света по ГОСТу

Подбирать лампочки ближнего света необходимо с учётом действующих стандартов качества. Российский ГОСТ предъявляет к лампам h7 следующие требования:

  • Световой поток должен быть в пределах 1350-1650 люмен;
  • Показатель мощности не должен превышать 58 ватт. Если это значение будет выше установленного стандарта, то возможен выход из строя системы электрооборудования автомобиля.

Важно выбрать и тип лампы ближнего цвета.

Какими бывают лампы H7

На сегодняшний день, существует три разновидности лампочек ближнего света:

  • Галогенные;
  • Ксеноновые;
  • Светодиодные.

Наиболее оптимальными для автомобиля считаются галогенные лампы. Чаще всего, автомобилисты отдают предпочтение именно им. Для них не потребуется монтажа дополнительного оборудования. К недостаткам таких ламп можно отнести: невысокий срок эксплуатации и сильный нагрев.

Светодиодные лампы обладают повышенным сроком службы. Их характеристики не ухудшаются вследствие встряски или удара. К минусам такой лампы относят сложность настройки светового потока и достаточно высокую цену.

Ксеноновым лампам не страшна вибрация. Они выдают свет, максимально приближенный к дневному. Из недостатков можно выделить высокую цену и необходимость монтажа дополнительного блока розжига.

Обзор популярных моделей

Philips Vision Plus

Лампочка соответствует всем утверждённым стандартам ГОСТ. Имеет мощность 55 ВТ и напряжение в 12 В.
Световой поток 1350 люмен, что соответствует низшему порогу утверждённого стандарта. Испытания в автомобиле не выявляют никаких отклонений в её работе. Такая лампочка имеет невысокую стоимость.

По сути, это бюджетный вариант лампочки ближнего света, которая будет прекрасно выполнять свои функции в правильно отрегулированных фарах. Технические испытания не выявили в её работе каких-либо недостатков.

Philips Vision Plus +50%

Лампочка ближнего света имеет мощность в 55 Вт и напряжение в 12 В. Её технические параметры полностью соответствуют заявленным стандартам. Производитель слегка преувеличил уровень прироста светового потока. Фактическая мощность составляет 1417 люмен, что на 5% выше предыдущей модели лампы ближнего света. Небольшое превышение уровня освещённости на 0,02 лк нельзя считать критическим. Мощность лампочки не выходит за утверждённые пределы. Обзор данной модели лампочки ближнего света не выявил в ней никаких недостатков. Такие лампы обеспечат комфорт и максимальную безопасность во время вождения.

Philips X-Treme Vision + 130%

На сегодняшний день, эта модель лампы ближнего света является одной из самых ярких. Уровень дальности светового потока увеличен на 130 метров. Температурный поток свечения составляет 3700 К. Такой автомобильный аксессуар прослужит владельцу около 450 часов. Лампа имеет мощность в 55 Вт и напряжение в 12 В.

К её недостаткам можно отнести слегка завышенную, но вполне оправданную цену.
Мощность не выходит за допустимые пределы. В целом, такой продукт способен создать оптимальный уровень освещённости и сделать езду в автомобиле максимально комфортной, независимо от времени суток.

OSRAM

Лампа имеет мощность 55 Вт и напряжение 12 Вт. Технические характеристики отвечают требуемым стандартам качества. Настораживает цоколь лампы. Он изготовлен аккуратно, но тёмные точки могут навести потребителя на мысль о подделке. Значение светового потока составляет 1283 лм, что ниже требуемой нормы. Мощность лампочки не выходит за пределы установленных стандартов. Световой поток немного ниже допустимого уровня. В целом, эта лампа проявляет себя хорошо во время испытаний. Для своей стоимости вполне приемлемый вариант. Эксперты ставят ей оценку: «пять с минусом».

NARVA лампа ближнего и дальнего света

Маркировка лампочки соответствует необходимым стандартам качества. Специалисты отмечают отсутствие на упаковке обязательного знака ультрафиолетовой защиты. Испытания лампочки показывают соответствие всем утверждённым критериям качества. Величина светового потока составляет 1298 лм. Это небольшое отклонение от действующих стандартов. Мощность не превышает допустимого уровня.

Как выбрать лампу ближнего света для автомобиля

При выборе лампочек необходимо придерживаться тех факторов, которые являются наиболее важными для автомобилиста. В первую очередь, большинство автолюбителей подбирают лампы ближнего света по следующим параметрам:

  • Комфорт глаз при освещении;
  • Срок службы;
  • Яркость светового потока;
  • Цена;
  • Иные показатели.

Как отмечают специалисты, не стоит приобретать более дешёвые лампы. Очень часто, за низкой стоимостью скрывается потеря качества продукции.

Выбор ламп ближнего света – ответственное мероприятие и к нему необходимо отнестись со всей серьёзность. От правильно подобранных лампочек напрямую зависит безопасность участников дорожного движения.

Видео тест ламп H7: какие самые яркие?

Понравилась статья?

Поделитесь ссылкой с друзьями в социальных сетях:

А еще у нас интересные e-mail рассылки, подписывайтесь! (1 раз в неделю)

Интересные материалы

Галогеновые, диодные и прочие лампы не ксенон (с. 271)

X72 – IPF XENON BLUE 5000K H7-12v 65w, class 140w (2шт)
XV72 — IPF H7 12v 55w 4100K class130W (2шт)
P0755W – KOITO WHITEBEAM 3 H7 12V 55W (100W) — 2 шт.
H-280 — PIAA Super Plazma GT-X H7 12V 55W~110W к-т
H-136 – PIAA Plazma Ion Yellow (2500K) H7 12V 55W~100W к-т
HE-275 — PIAA Super White (3800K) H7 12V 55W~110W к-т
HE-309 — PIAA Xtreme White Plus (4000K) H7 12V 55W~110W к-т
H-361E — PIAA Chrome Mirror White (4100K) H7 12V 55W~110W к-т
H-218 — PIAA Xtreme White (4150K) H7 12V 55W~110W к-т
H-381 — PIAA Super White & White (4300K) H7 12V 55W~110W к-т
H-260 — PIAA Xtreme Force (4700K) H7 12V 55W~110W к-т
H-289E — PIAA Plazma Spark Blue (7500K) H7 12V 55W~100W к-т
64210NBU-DUOBOX — Osram «NIGHT BREAKER UNLIMITED H7» 12В 55Вт, 2шт
64210NBU-01B — Osram «NIGHT BREAKER UNLIMITED H7» 12В 55Вт, 1шт
64210CB-01B, 64210CB – OSRAM Cool Blue H7 (4000K) – 1 шт
64210CB-02B — OSRAM Cool Blue H7 (4000K) – 2 шт
64210SV2-DUOBOX — Osram «SILVERSTAR 2.0 H7» 12В 55Вт, 2шт
64210SV2 Osram — «SILVERSTAR 2.0 H7» 12В 55Вт, 1шт
64210ULT-DUOBOХ — Osram «ULTRA LIFE H7» 12В 55Вт, 2шт
64210ULT — Osram «ULTRA LIFE H7» 12В 55Вт, 1шт
12972XPS2– Philips X-treme Power H7 к-т
12972XPB1 — Philips X-treme Power h2 – 1шт
12972NGRDLB1 — Philips Night Guide H7 12V 55W(рефлектор) — 1шт
12972NGSDLB1- Philips Night Guide H7 12V 55W(линза) — 1шт
12972NGRDLS2 — Philips Night Guide H7 12V 55W(рефлектор) к-т
12972NGSDLS2 — Philips Night Guide H7 12V 55W(линза) к-т
12972 BV +B1- Philips Blue Vision(4000К) h2 12V 55W -1шт
12972BVSM — Philips Blue Vision Н7+ габариты W5W к-т
12972CVS2 — Philips Cristal Vision Н7+ габариты W5W к-т
12972DVS2, 12142DVS2 — Philips Diamond Vision(5000К) H7 12V 55W к-т
12972 LL — лампа без упаковки Philips LongerLife
12972 LLC1 — картонная корбка Philips LongerLife
12972 LLB1 — в блистере Philips LongerLife

x

ЛАМПА загорается Тестирование на COVID-19

Используемые сегодня тесты на COVID-19 трудоемки и сложны. Они требуют, чтобы опытный профессионал взял образцы, провел реакцию и проанализировал результаты. Кроме того, необходимы специальные машины, химические реактивы, сложная транспортная логистика и т. Д. Но что, если бы тестирование на COVID-19 не было таким обременительным?

Два препринта, опубликованные за последнюю неделю, предполагают, что наука уже здесь, чтобы сделать простой, легко читаемый тест на COVID-19 возможным.Одно исследование проведено группой исследователей из Медицинской школы Вейлла Корнелла в Нью-Йорке — эпицентре эпидемии в Соединенных Штатах. Другой — от группы из Техниона — Израильского технологического института в Хайфе, Израиль.

В основе техники, описанной в обеих статьях, лежит изотермическая амплификация, опосредованная петлями, или LAMP. Разработанная группой японских исследователей из Медицинской школы Университета Осаки в Японии два десятилетия назад, LAMP выполняется в одной пробирке при постоянной температуре за очень небольшую плату для обнаружения ДНК.Этот метод быстро усиливает ДНК — с высокой специфичностью и эффективностью.

LAMP основан на ДНК-полимеразе и наборе из четырех-шести праймеров, предназначенных для распознавания в общей сложности шести различных последовательностей целевой ДНК. Один из внутренних праймеров инициирует смещение цепи и амплификацию. Нить, вытесняющая ДНК-полимеразу, замещает две исходные цепи ДНК, создавая новую цепь. Затем отдельный праймер замещает вновь образованную цепь, и петля образуется из-за комплементарных последовательностей на праймерах.Процесс смещения, амплификации и образования петель продолжается до тех пор, пока ДНК не образует гантелевую структуру. Накопление этих побочных продуктов амплификации может быть легко обнаружено. (Для визуального объяснения того, как работает LAMP, см. Видео в конце этой статьи.) Добавьте к вышеуказанному протоколу этап обратной транскриптазы, и обнаружение РНК может быть выполнено аналогичным образом — с использованием RT-LAMP.

Работа Isreal опубликована в виде препринта в MedRxiv .Заголовок препринта (работа, еще не прошедшая рецензирование): «Обнаружение вируса SARS-CoV-2 на месте непосредственно у пациентов».

Авторы разработали RT-LAMP для обнаружения РНК SARS-CoV-2 непосредственно из клинических диагностических мазков пациентов-людей, без этапов очистки РНК. Они потратили время на настройку протокола, особенно для SARS-CoV-2. После первого раунда тестов ложных срабатываний не было, но процент истинных срабатываний был очень низким.Они продолжали корректировать условия, чтобы найти оптимальные условия. После того, как протокол был проверен на мазках из носа, они перешли к образцам слюны. Используя очень небольшой набор самостоятельно собранных образцов — от трех разных подтвержденных пациентов и одного подозреваемого отрицательного субъекта — подтвержденные пациенты были признаны положительными как по RT-LAMP, так и по RTqPCR из слюны, а предполагаемый отрицательный субъект был подтвержден отрицательным.

«Простота обнаружения SARS-CoV-2 без продуманной стадии выделения и очистки РНК, а также тот факт, что этот метод может значительно сократить количество профессионалов, необходимых для тестов на обнаружение SARS-CoV-2» — вот что Наама Гева-Заторски, доктор философии , профессор нанобиотехнологии и наномедицины в Технионе — Израильском технологическом институте и старший автор статьи, считает очень интересным.

Гева-Заторски добавил, что они предполагают, что тест RT-LAMP будет использоваться в качестве теста для наблюдения за большим количеством людей в сообществе. «Обнаружение — ключ к успеху», — пишут авторы. «Мы считаем, — продолжили они, — что простой и легкий метод обнаружения, предпочтительно такой, который может быть выполнен и интерпретирован на месте, может снять некоторые из текущих ограничений и помочь реализовать эффективную и безопасную стратегию выхода из блокировки. ”

LAMP отслеживает SARS-CoV-2 вокруг Нью-Йорка

Лаборатория Мэйсона в Weill Cornell сообщила на прошлой неделе о разработке аналогичного колориметрического теста на основе LAMP, который может идентифицировать присутствие SARS-CoV-2 как в образцах из полости рта, так и в носоглотке.

Эта пандемия COVID-19, писали они, подчеркнула острую необходимость в «быстрой, масштабируемой диагностике, которая может обнаруживать инфекцию SARS-CoV-2, исследовать эволюцию штамма и отображать реакцию хозяина у пациентов».

Их работа была опубликована в препринте на прошлой неделе в bioRxiv под названием «Профили транскриптомов хозяина, вирусов и окружающей среды тяжелого острого респираторного синдрома коронавируса 2 (SARS-CoV-2)».

Крис Мейсон, доктор философии

Команда разработала и оптимизировала экспресс-анализ LAMP для обнаружения инфекции SARS-CoV-2 в образцах мазков из носоглотки и лизатах мазков из ротоглотки.При проверке эффективности на 201 клинически аннотированном образце анализ имел 99% специфичность и 95% чувствительность. Затем команда разработала крупномасштабную платформу метатранскриптомики дробовика для всестороннего профилирования образцов мазков из носоглотки, собранных у пациентов с RNA-seq.

Обе технологии были использованы для профилирования 338 клинических образцов, протестированных на SARS-CoV-2, и 86 образцов окружающей среды, собранных в зонах с интенсивным движением в метро Нью-Йорка в начале марта 2020 года. При этом они создали широкую молекулярную картину COVID- 19 эпидемия в Нью-Йорке.

Использование LAMP для тестирования COVID-19 — «отличная идея, которую нужно просто доработать и оптимизировать», — отметил Крис Мейсон, доктор философии, доцент Медицинского колледжа Вейлла Корнелла и старший автор статьи. Оба исследования, как отметил Мейсон, показывают, что у него есть «реальный потенциал для широкого и легкого использования».

Авторы статьи medRxiv написали, что следующие шаги, необходимые для того, чтобы довести это до клиники, — это «дальнейшая корректировка протокола по образцам слюны, протестированным на большой когорте и по сравнению со стандартным методом.”

Его простота и низкая стоимость, добавили они, упростят постоянный мониторинг подозреваемых объектов. По их утверждению, при дальнейшем развитии этот метод может быть применен в медицинских клиниках, пунктах въезда, домах престарелых, на рабочих местах и ​​т. Д. И даже может быть легко адаптирован к другим возникающим патогенам.

SARS-CoV-2 Прямое обнаружение без выделения РНК с петлевой изотермической амплификацией (LAMP) и CRISPR-Cas12

Front Med (Лозанна).2021; 8: 627679.

Альфредо Гарсия-Вензор

1 Лаборатория функциональной геномики рака, Национальный институт медицины, Мехико, Мексика

Берта Руэда-Сарасуа

1 Лаборатория функциональной геномики рака, Институт функциональной геномики Genómica, Мехико, Мексика

Eduardo Marquez-Garcia

2 Отделение молекулярной биологии, Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias, Мехико, Мексика

Vilma Maldonado

3 Лаборатория эпигенетики, Instituto Genómional de Medicina Город, Мексика

Анжелика Монкада-Моралес

2 Отделение молекулярной биологии, Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias, Мехико, Мексика

Хирам Оливера

4 Instituto Nacional de Referencia Epidemiológica

, Мексика

Лопес

4 Instituto Nacional de Refer encia Epidemiológica, Мехико, Мексика

Joaquin Zuñiga

2 Отделение молекулярной биологии, Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias, Мехико, Мехико

Хорхе Мелендес-Зайгла

Национальная лаборатория медицины и генетики Genómica, Мехико, Мексика

1 Лаборатория функциональной геномики рака, Instituto Nacional de Medicina Genómica, Мехико, Мексика

2 Отделение молекулярной биологии, Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias, Мехико, Мексика

3 Лаборатория эпигенетики, Instituto Nacional de Medicina Genómica, Мехико, Мексика

4 Instituto Nacional de Referencia Epidemiológica, Мехико, Мексика

Под редакцией: Лей Чен, Школа медицины Шанхайского университета Цзяо Тонг, Китай

Рецензент: Антонио Дженнаро Никотера, Мессинский университет, Италия; Шуайинь Чен, Университет Чжэнчжоу, Китай

Эта статья была отправлена ​​в раздел «Инфекционные болезни — наблюдение, профилактика и лечение» журнала «Границы в медицине»

Поступила в редакцию 9 ноября 2020 г .; Принята в печать 25 января 2021 года.

Copyright © 2021 Гарсия-Вензор, Руэда-Сарасуа, Маркес-Гарсия, Мальдонадо, Монкада-Моралес, Оливера, Лопес, Зуньяга и Мелендес-Зайгла.

Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License (CC BY). Использование, распространение или воспроизведение на других форумах разрешено при условии указания автора (авторов) и правообладателя (ов) и ссылки на оригинальную публикацию в этом журнале в соответствии с принятой академической практикой.Запрещается использование, распространение или воспроизведение без соблюдения этих условий.

Abstract

На сегодняшний день во всем мире зарегистрировано более 49 миллионов подтвержденных случаев коронавирусной болезни 19 (COVID-19). Текущие диагностические протоколы используют qRT-PCR для обнаружения вирусной РНК, что является дорогостоящим и требует сложного оборудования, обученного персонала и предварительного выделения РНК. По этой причине нам нужен более быстрый, прямой и более универсальный метод обнаружения для лучшего эпидемиологического управления вспышкой COVID-19.В этой работе мы предлагаем прямой метод без экстракции РНК, основанный на методе изотермической амплификации, опосредованной петлей (LAMP) и кластеризованного белка, связанного с регулярными интервалами коротких палиндромных повторов-CRISPR (CRISPR-Cas12), который позволяет быстро обнаруживать SARS-CoV -2 из образцов пациентов с высокой чувствительностью и специфичностью. Мы получили предел обнаружения 16 копий / мкл с высокой специфичностью и по доступной цене. Считывание диагностического теста может быть выполнено с помощью термоциклера для ПЦР в реальном времени или невооруженным глазом в трансиллюминаторе синего света.Наш метод был протестирован на небольшом наборе клинических образцов и дал многообещающие результаты.

Ключевые слова: COVID-19, SARS-CoV-2, диагностика, LAMP, CRISPR-Cas12a

Введение

Глобальная вспышка COVID-19, вызванная вирусом SARS-Cov-2, является одной из основных глобальных проблем из-за быстрого распространения по миру. Официальные цифры на 7 ноября 2020 года — 49 636 193 подтвержденных случая заболевания и 1247 187 смертей на всей планете (Университет Джона Хопкинса, https: // coronavirus.jhu.edu/map.html; последний доступ 07 ноября).

Точный и быстрый скрининг возможных инфицированных субъектов является одной из основных стратегий сдерживания вспышки COVID-19, снижения воздействия на смертность населения и предотвращения переполнения больниц. Однако современные диагностические стратегии в основном состоят из анализа qRT-PCR, который имеет недостатки, так как требует выделения РНК и, таким образом, занимает несколько часов для получения результата. Эти аспекты препятствовали применимости систем qRT-PCR для эффективного сдерживания вспышки COVID-19 (1).

По этим причинам чрезвычайно важно разработать новые диагностические методы, которые улучшают стоимость, увеличивают количество диагностических средств, способных выполнять анализы, и время, необходимое для получения результата. Технология изотермической амплификации, опосредованной петлей (LAMP), позволяет осуществлять специфическую амплификацию последовательностей ДНК или РНК-мишеней при одной температуре (в отличие от трех этапов, необходимых для ПЦР), обеспечивая непрерывную амплификацию цели, что делает ее более универсальной, чем ПЦР.LAMP ранее использовался для диагностики различных патогенов с низкой стоимостью, с высокой чувствительностью и специфичностью (2–5).

Недавно Zhang et al. (6) использовали технологию LAMP для специфического обнаружения SARS-CoV-2, наблюдая многообещающие результаты, которые могут иметь прямое применение в текущей вспышке COVID-19. Эти результаты позволили нам воспользоваться универсальностью и чувствительностью LAMP для стандартизации диагностического набора для обнаружения SARS-CoV-2 в условиях ограниченных ресурсов.

В этой работе мы разработали практический метод диагностики SARS-CoV-2 с использованием реакции LAMP для амплификации определенной области мРНК гена SARS-CoV-2 N и протестировали три основных метода обнаружения: накопление флуоресценции, колориметрическое обнаружение и LbCas12a. -опосредованное обнаружение. Полученные результаты показали, что наилучший предел обнаружения (LOD) был получен при использовании термоциклера кПЦР для измерения накопления флуоресценции с течением времени. Интересно, что колориметрический подход давал сопоставимые LOD, чем детектирование, опосредованное флуоресценцией.Однако его зависимость от изменений pH делает его ненадежным для использования с плохо забуференными образцами, такими как слюна.

Материалы и методы

Праймеры и зонды

Мы использовали два разных набора праймеров для нашего диагностического анализа: один нацелен на транскрипт гена SARS-CoV-2 N, а другой — на мРНК человеческой РНКseP POP7. Секвенирование праймеров было получено из предыдущей работы, а используемые последовательности перечислены в дополнительной таблице 1 (7). Для контроля мы синтезировали фрагмент мРНК гена N и мРНК RNAseP POP7 в виде генных блоков (gBlocks) (IDT, Cal., США) (дополнительная таблица 2). Кроме того, для работы с контролем гена SARS-CoV-2 N РНК, gBlock был in vitro, транскрибировали с использованием набора RiboMAX Large Scale RNA Production System и следуя инструкциям производителя (P1280, Promega, MA, USA). Число копий РНК N-гена определяли, используя ее молярную концентрацию, и ее серийно разбавляли для получения группы разведений известного числа копий, используемых для расчета с ограничением вычислений (LOD).

Для обнаружения бактерии Lachnospiraceae Cas12a (LbCas12), опосредованной обнаружением, мы использовали две ранее разработанные направляющие РНК (гРНК), нацеленные на ген SARS-CoV-2 N и ампликоны RNAseP POP7.Последовательность gRNA показана в дополнительной таблице 3. Также для считывания флуоресценции LbCas12 мы использовали зонд Taqman (5’FAM / 3’BHQ1), который, как предполагается, разлагается при специфической активации LbCas12a.

LAMP Reactions

Реакции с флуоресцентной LAMP проводили с использованием набора WarmStart LAMP (E1700L, New England Biolabs, NE, США), и колориметрическую смесь WarmStart LAMP 2X Master Mix (M1800L, New England Biolabs, NE, США) использовали для колориметрических исследований. ФОНАРЬ. Все реакции с LAMP проводили в соответствии с инструкциями производителя, на каждый 29 мкл реакции мы использовали 2.5 мкл смеси праймеров LAMP (F3, B3: 2 мкМ, LF, LB: 4 мкМ и FIP, BIP: 16 мкМ), 5 мкл образца или контроля и концентрация MgSO 4 была увеличена до 6 мМ путем добавления 1,13 мкл на реакцию 100 мМ раствора. Для колориметрических и флуоресцентных реакций LAMP амплификацию проводили путем инкубации при 65 ° C в течение 40 мин. Для флуоресцентного детектирования LAMP-реакций в реальном времени мы использовали термоциклер QuantStudio 3 Real-Time PCR system (ThermoFisher Scientific, Массачусетс, США), используя программу ПЦР, состоящую из 160 циклов по 15 с каждый.Количественную оценку флуоресценции по конечной точке проводили в многомодовом детекторе Beckman Coulter DTX 880 (Beckman Coulter, Ньон, Швейцария) с использованием фильтров излучения и возбуждения FAM. Прямая визуализация флуоресценции проводилась в настольном трансиллюминаторе.

Обнаружение LbCas12a

Для обнаружения, опосредованного LbCas12a, мы использовали коммерческий LbaCas12a (EnGen LbaCas12a, M0653T, NEB, NE), а РНК была синтезирована в виде олигонуклеотидов РНК IDT (Калифорния, США). Во-первых, комплексы LbaCas12a-gRNAs были созданы путем инкубации LbaCas12a (50 нМ, конечная концентрация) и gRNA (62.5 нМ) в 1X NEBuffer 2.1 в конечном объеме 20 мкл на реакцию. Комплексы LbaCas12a-gRNA инкубировали 30 мин при 37 ° C, после инкубации добавляли зонд Taqman до конечной концентрации 500 нМ и переносили на лед. После завершения реакции LAMP 2 мкл каждой реакции LAMP добавляли к 20 мкл комплексов LbaCas12a-gRNA, и реакции инкубировали при 37 ° C в течение 10 мин. Регистрация флуоресценции в реальном времени осуществлялась с помощью термоциклера QuantStudio 3 Real-Time PCR system (ThermoFisher Scientific, Массачусетс, США) с использованием программы qPCR из 80 циклов по 15 с при 65 ° C.Визуальный контроль флуоресценции проводили с использованием трансиллюминатора синего света (Invitrogen, CA, USA).

In silico Alignment

Мы использовали blastn от NCBI для выравнивания in silico , мы сравниваем каждую последовательность праймеров с основным вирусом и бактериями, которые вызывают симптомы, похожие на covid-19, или связаны с вирусом SARS-CoV -2 (Candida albicans taxid: 5476, Neisseria meningitidis taxid: 487, pseudomonas aeruginosa taxid: 287, Staphylococcus aureus taxid: 1280, таксид гриппа A: 11320, таксид гриппа B: 11520, летучая мышь MERS-like coronavirus taxidERS: 26-64423, Таксид CoV: 1335626, таксид HCoV-SARS: 694009, таксид HCoV-229E: 11137, таксид HCoV-OC43: 31631, таксид HCoV-NL63: 277944 и таксид HCoV-HKU1: 2

).

Кривые ROC и значения AUC

Кривые рабочих характеристик приемника (ROC) и значения площади под кривой ROC (AUC) были рассчитаны с использованием пакета pROC R (1.16.2) со значениями порога цикла (Ct) LOD кривые или оценка образцов пациентов по флуоресцентным LAMP-реакциям или качественные значения использования вариации Cas12a. Случаи без амплификации считались Ct = 160. AUC, равная 50%, случайно связана с положительным результатом, в то время как мы считаем процент выше 90% приемлемым и точным результатом.

Обработка образца и экстракция РНК

Для определения LOD мы добавили известное количество копий РНК N-гена к 8 мкл мазка из носа здорового донора, а затем добавили 2 мкл 5-кратного лизирующего раствора (0,5 M DTT и 5 мМ EDTA. ). Образцы инкубировали при 42 ° C в течение 20 минут, затем при 64 ° C в течение 5 минут. Эти шаги позволили нуклеазную инактивацию и лизис биологического материала с высвобождением нуклеиновой кислоты без экстракции. Пять микролитров этих инактивированных образцов добавляли к 20 мкл реакции LAMP и обрабатывали, как указано ранее.Кроме того, этот простой метод инактивации использовался для инактивации вирусов и лизиса образцов от пациентов.

Пациенты

Институциональный наблюдательный совет (IRB) Национального института респираторных заболеваний (INER) рассмотрел и утвердил протоколы исследований COVID-19. Этот проект был одобрен IRB под регистрационным номером B09-20. Все субъекты или их юридические ответственные лица, особенно в случае пациентов в критическом состоянии, предоставили письменное информированное согласие на эти исследования, и они разрешили хранение своих носоглоточных образцов в репозиториях INER для этого и будущих исследований.В этом исследовании мы не собирали образцы от несовершеннолетних / детей, были включены только молодые люди старше 17 лет.

Всего в отделении молекулярной биологии «Unidad de Biología Molecular» Национального института респираторных заболеваний в Мехико было собрано 34 образца пациентов. Мы собрали 31 мазок из носа и 3 образца слюны у лиц, которые обратились в отделение неотложной помощи института в период с 01 марта по 31 мая 2020 г .; совпало с ростом вспышки COVID-19 в Мехико.Экстракцию РНК проводили путем добавления 2 мкл раствора для лизиса (DTT 0,5 M и EDTA 5 мМ) к 8 мкл образца с последующей инкубацией при 42 ° C в течение 20 минут и 64 ° C в течение 5 минут. Для реакций LAMP мы использовали 5 мкл экстрагированных образцов для амплификации гена SARS-CoV-2 N и 5 мкл для амплификации POP7. Измерение флуоресценции в реальном времени выполняли с использованием системы ПЦР в реальном времени StepOnePlus (ThermoFisher, MA, США) для реакций RT-qPCR и LAMP. Присутствие вирусного транскрипта сначала оценивали с помощью одностадийной ОТ-ПЦР с модифицированным методом Берлина, внутренне стандартизованным, с использованием специфических олигонуклеотидных последовательностей для генов E и RdRp (2019-nCoV) и подтверждали тестом LAMP.

Анализ для обнаружения SARS-CoV-2 с помощью метода LAMP-LbCas12a

Пробирка для анализа LAMP содержала 24 мкл смеси с праймерами LAMP и ферментом Bst. В эту пробирку добавляли 5 мкл образца или контроля и инкубировали в течение 40 мин при 65 ° C. По истечении этого времени 2 мкл этой реакции добавляли в пробирку LbCas12a, содержащую комплекс фермент-гРНК и репортер. Реакционную смесь инкубировали в течение 10 мин при 37 ° C для наблюдения или измерения флуоресценции ().

LAMP-Cas12 диагностический метод для обнаружения SARS-CoV-2.На схеме показаны действия по обнаружению вирусов. Из предыдущего инактивированного клинического образца мы добавляем смесь LAMP, содержащую специфические праймеры, которые нацелены на N-ген вируса и амплифицируют его, если он присутствует в образце. Одновременно с этим фермент LbCas12a инкубируют со специфичной для N-гена гРНК, через 30 мин добавляется репортер, содержащий флуорофор. Когда комплекс LbCas12a-gRNA находит свою мишень, он подвергается неспецифическому расщеплению репортера, который высвобождает флуорофор и испускает флуоресценцию.

Результаты

Чувствительность и специфичность обнаружения SARS-CoV-2 LAMP

Для обнаружения вируса SARS-CoV-2 мы использовали два ранее опубликованных набора праймеров, один нацелен на конкретную область N-гена SARS-CoV-2 и человеческий контрольный набор, нацеленный на ген RNAseP POP7 (3). Набор N-генов обнаружил присутствие вируса COVID-19, тогда как набор POP7 был контролем на наличие человеческих транскриптов. Анализ выравнивания выполняли для оценки специфичности праймеров для амплификации LAMP для N-гена.Мы рассмотрели основные патогены, вызывающие респираторные симптомы, такие как Covid-19. Не было обнаружено перекрестного выравнивания ни с одним вирусом или бактериями, что свидетельствует о высокой специфичности последовательностей, используемых для обнаружения. Для обнаружения амплификации мы использовали две основные системы: флуоресценцию и колориметрию. Для системы флуоресцентного обнаружения мы добавили интеркалирующий краситель ATTO с аналогичными спектрами поглощения / излучения, чем SYBR-зеленый, в реакции LAMP. Увеличение флуоресценции регистрировали с помощью термоциклера для ПЦР в реальном времени, а окончательную флуоресценцию — с помощью флуориметра для многолуночного планшета.Колориметрический анализ основан на подкислении реакционного буфера системой амплификации, что может быть обнаружено колориметрическим датчиком pH. Эта система обнаружения имеет то преимущество, что не требует дополнительных устройств обнаружения, кроме человеческого глаза. Кроме того, чтобы улучшить применимость метода к реальным потребностям врачей, мы стандартизировали быстрый метод инактивации и лизиса образцов, основанный на высоких температурах и восстановительных условиях. С этой целью мы приготовили раствор для лизиса с 5-кратной концентрацией, добавили 1 мкл раствора для лизиса на каждые 4 мкл назального мазка и нагрели образцы при 42 ° C в течение 20 минут, а затем при 64 ° C в течение 5 минут.

Во-первых, мы хотели определить предел обнаружения этих анализов, для этого мы использовали синтетическую РНК N-гена SARS-CoV-2, разведенную до определенной концентрации числа копий с использованием 5 мкл объема образца на реакцию ( ). Обнаружение в реальном времени амплификации LAMP в термоциклере для количественной ПЦР показало 100% -ную скорость обнаружения (LOD) в образцах с 66 копиями / мкл после 30 минут амплификации (). Чтобы увеличить LOD, мы увеличили время реакции до 50 мин. Даже когда мы обнаружили снижение LOD на 6.6 копий / мкл, эта модификация также увеличивала вероятность ложноположительного обнаружения, поскольку доля амплифицированных NTC увеличилась до 40% (). По этой причине мы увеличили количество образцов, подтвердив LOD с 66 копиями / мкл после 40 мин амплификации (). Анализ кривой ROC показал, что LOD 66 копий / мкл представляет собой хороший результат с точки зрения специфичности и чувствительности (AUC 99,4%, CI 95 = 98–100%) ().

Таблица 1

Количество копий в образцах.

902 902 900 902 реакции LAMP с помощью флуоресценции в реальном времени с 30 и 50 мин.

Образец сП / 5 мкл образец сП / мкл
NTC 0 S
S33 33 6,6
S55 55 11
S82 85 17
330 66
S550 550 110
S1000 1,000 200
S1600 1,600 320 1,600 320

9013 9013 907 9013 902 902 9017 9017 902 902 902 на 30 мин. 16 % %
Положительность сигнала
Образцы N1 N2 Дет. при 50 мин.5 + + + 60% 80%
S33 + + + — 902% 100%
S55 + + + + + 100% 100%
S82 + + + + + + 902 100% 100%
S165 + + + + 80% 100%
+ + 100% 100%
S550 + + + + + 100% 1009 34 + + + + + 100% 100%
S1600 + + + +

Таблица 3

Предел обнаружения реакции LAMP по флуоресценции в реальном времени.

NS 9033 NS 9033 902 902 5 NS NS NS NS NS 902 109 90 233108 902 902 81% 902 33103 105233 105 38 39 для значений

9902 концентрация копий резко возросла с SARS-CoV-2.Набор данных, используемый для построения кривых ROC и значений AUC, соответствует кривым LOD для флуоресцентных реакций LAMP, проанализированных с использованием термоциклера реального времени. При разведении 330 копий мы можем наблюдать приемлемую точность теста (AUC> 90,0%).

Специфичность реакции LAMP N-гена оценивалась с использованием образцов общей РНК человека (MCF-7) без транскриптов N-гена (). Мы наблюдали, что образцы MCF-7 ведут себя как образцы NTC (данные не показаны). Как и ожидалось, мы наблюдали специфическую амплификацию в образцах MCF-7 с использованием набора праймеров POP7.Кроме того, мы использовали панель контроля, включая грипп A / h2N1 / pdm09, Influenza B и другие распространенные человеческие коронавирусы, такие как HCoV-NL63, HCoV-HKU1, HCoV-OC43 и HCoV-229E, для проверки специфичности теста. Все случаи были отрицательными на SARS-CoV-2, поэтому перекрестной реактивности с этими вирусами нет.

Визуальные результаты флуоресцентных и колориметрических систем LAMP. (A) Типичные изображения визуального контроля флуоресцентных реакций LAMP с использованием УФ-трансиллюминатора, флуоресценция воспринимается в реакциях 66 и 320 копий / 5 мкл. (B) Репрезентативные изображения кривых LOD колориметрических LAMP-реакций: положительные реакции изменяются в сторону желтого цвета, а отрицательные остаются розовыми. (C) Типичные изображения положительных и отрицательных колориметрических результатов LAMP.

Затем мы проанализировали окончательную флуоресценцию LAMP-реакций с помощью флуориметра для многолуночного планшета и фильтра флуоресцеина изотиоцианата (FITC). Результаты показали, что окончательное обнаружение флуоресценции было менее чувствительным, чем обнаружение флуоресценции в реальном времени, поскольку LOD, полученный для окончательного обнаружения флуоресценции, составлял 1000 копий ().Эти результаты подчеркивают, что окончательное обнаружение флуоресценции флуорометром показало сильное падение чувствительности и воспроизводимости.

Таблица 4

Предел обнаружения реакции LAMP по конечной флуоресценции.

Сигнал положительности (значения Ct)
Образец N1 N2 9034

9034 N3

N3 902 N6 N7 N8 N9 N10 N11 N12

9013 9013 902 902

N16
N17 N18 N19 N20 N21 Det 40 мин NS NS 152 158 — 90 234 130 NS NS NS 157 — 34
NS NS 89 79 86 120 146 123 114 110 NS 102 124 102 124 102 124 102 124 102 124 119 129 133 NS 126 67%
S55 78 84 109 96 77 96 77 1402 NS 114 114 NS NS 113 NS 129 115 NS 119 NS 71% 99 106 91 114 99 112 160 120 138 NS NS 142 100 127 NS 104 114 111 86%
S165 104 87234 S165 104 87234 NS 138 142 134 122 119 106 NS 114 108 107 121 110 121 110
S330 101 111 118 106 96 130 121 131 104 115 902 98 95 100 95 106 68 104 104 100%
S550 95 85 106 114 130 142 90 118 120 110 106 902 902 902 85 124 105 77 100%
S1600 25 26 25 26 25 38 42 32 32 33 33 32 33 32 33 31 32 100%
% С
Положительность сигнала
Образцы N1 N2 N3 902 903 903 903 903 903 903 903 903 903 902 903 902 0%
S16.5 0%
S33 + 20% 20%
S82 + 20%
S165 + S165 +
S330 + 20%
S550 + 902 + + + + 100%
S1600 + + + + 100%

Было продемонстрировано, что рические реакции легко и быстро анализируются на глаз.Затем мы стремились установить пределы этой системы обнаружения. Мы проанализировали LOD колориметрических LAMP-реакций. Для этого мы добавили в образцы мазка из носа известное количество синтетических транскриптов N-гена, инактивировали и лизировали эти образцы. LOD, полученный для этих образцов с добавками, составлял 66 копий / мкл, как и LOD, полученный с помощью флуоресценции в реальном времени (). Мы обнаружили, что реакция N-гена с 320 копиями / мкл изменила цвет реакции на желтый, в отличие от реакции NTC, которая оставалась розовой ().

Наконец, чтобы уменьшить предел обнаружения системы обнаружения LAMP, мы доказали другую систему обнаружения флуоресценции, основанную на реакциях LbCas12a. LbCas12a представляет собой бактериальную эндонуклеазу, которая распознает и гидролизует последовательность целевой ДНК, комплементарную последовательности направляющей РНК (гРНК). Интересно, что как только LbCas12a распознает и гидролизует свою последовательность-мишень, он активирует эндонуклеазный домен, который разрушает любую доступную молекулу ДНК (коллатеральная нуклеазная активность). Чтобы использовать это свойство LbCas12a, мы сконструировали две мРНК, нацеленные на N-ген и POP7, и мы усилили сигнал путем добавления гашеного ДНК-зонда, который флуоресцирует после разрушения активированным LbCas12a.Для реакций LbCas12a мы добавили 5 мкл LAMP-реакций, предварительно инкубированных в течение 30 мин. Интересно, что регистрация флуоресценции LbCas12a в реальном времени показала, что эта система обнаружения улучшает LOD простой реакции LAMP, измеренной с помощью ПЦР в реальном времени, до 16 копий / мкл (). Это также улучшило визуальное обнаружение реакции LAMP с использованием трансиллюминатора синего света ().

Таблица 5

Предел обнаружения реакции LbCas12a по конечной флуоресценции.

902 9023 3 — +
Положительность сигнала
Образец N1 N2 N3

9013 9013 903 902 903 902 902

N7 N8 N9 N10 N11 N12 N132

9034 9013 9013 9034 9013 9013 9013 9013 9013 9034

NTC 0%
S40 + + + + 26%
902 + 902 + 902 + 902 + + + + + + + + + + + + 1003 902 902 902 902 902 902 902 + + + + + + + + + + + + + 100233 100234 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
S550 + + + + + + + + + + + + + + + + + 100%
S1600 + + + + + + + + + + + + + 100%

Визуальные результаты dCas12-опосредованного обнаружения.Результаты показывают репрезентативное изображение сигналов флуоресценции в реакциях dCas12a. Как видно, положительные сигналы светятся зеленым цветом при освещении синим светом. Однако отрицательные сигналы имеют очень слабое свечение.

Наконец, мы доказали эффективность нашей системы обнаружения SARS-CoV-2 на образцах пациентов, ранее проанализированных методом RT-qPCR. Как показано на рисунке, реакции LAMP показали хорошую эффективность в обнаружении вирусных транскриптов SARS-CoV-2 в образцах пациентов. Однако, используя кПЦР в качестве стандарта, мы наблюдали, что флуоресцентная система LAMP не смогла обнаружить два из двенадцати отрицательных образцов.Кроме того, флуоресцентная система LAMP показала точность десяти из десяти в положительных образцах, с которой мы получили значение AUC кривой ROC 90,8%, CI 95 = 77,6–100% ().

Таблица 6

Эффективность ЛАМПЫ в образцах пациентов.

Отрицательный 9169 Положительный 916 9162 1213 9016 9169 916 916 положительная 902 Назальный мазок 916 916 922 Положительный 916 922
Образец Происхождение Результат qPCR Результат LAMP
1 16 Отрицательный2 Экстракция Отрицательный Отрицательный
3 Носовой мазок Отрицательный Отрицательный
4 Назальный мазок Отрицательный 34 Отрицательный 34 Отрицательный 34 Отрицательный 34
6 Назальный мазок Отрицательный Отрицательный
7 Назальный мазок Отрицательный Отрицательный
Отрицательный
Отрицательный
N мазок asal отрицательный положительный
10 слюна отрицательный отрицательный
11 слюна отрицательный отрицательный2 отрицательный отрицательный2 отрицательный
13 Экстракция Положительная Положительная
14 Экстракция Положительная Положительная
15 Носовая 916 916 916 916 положительная 15 Положительный Положительный
17 Назальный мазок Положительный Положительный
18 Назальный мазок Положительный Положительный Положительный 9 Положительный 9 Положительный
20 Носовой мазок Положительный Положительный
21 Назальный мазок Положительный Положительный
Положительный

Кривые ROC и значения AUC в тесте, проведенном с образцами пациентов. (A) Кривая ROC и значение AUC были рассчитаны с использованием значений Ct флуоресцентных LAMP-реакций с использованием образцов пациентов, предварительно проверенных методом ПЦР в реальном времени. (B) Кривая ROC и значение AUC учитывают качественные результаты повышения Cas12a, использованные в проверенных образцах пациентов.

Результаты, полученные к этому моменту, предполагают, что реакции LAMP являются надежным методом обнаружения SARS-CoV-2. Поскольку усиление может быть обнаружено несколькими методами, колориметрический метод является наиболее универсальным для применения в полевых условиях, а флуоресцентный метод в дополнение к системе LbCas12a более разумен и легче интерпретируется, если медицинское учреждение считает с помощью термоциклера в реальном времени () .Эта система улучшает кривую ROC, достигая значения AUC 100,0%, CI 95 = 100–100% с использованием образцов пациентов, предварительно проверенных стандартным методом qPCR (). Кроме того, реакции LAMP подходят для прямого использования образцов из методов быстрого лизиса, как описано здесь.

Таблица 7

Эффективность Cas12a в образцах пациентов.

9162 9033 Nasal 9162 9034 9162 9162 Негативный 922 тампон 81613 Положительный
Образец Происхождение Результат qPCR Результат Cas12a
1 отрицательный отрицательный
3 мазок из носа отрицательный отрицательный
4 назальный тампон отрицательный отрицательный 9169 отрицательный Отрицательный
6 Назальный мазок Отрицательный Отрицательный
7 Назальный мазок Положительный Положительный
902 902 9163 Положительный 902 9169 Положительный 9 Носовой мазок Положительный Положительный
10 Назальный мазок Положительный Положительный
11 Назальный мазок Положительный Положительный Положительный 9 Положительный 9 Положительный

Наш протокол обнаружения LAMP / Cas12 — это простой и универсальный метод, преимущество которого заключается в получении результата всего за 65 минут с момента получения образца.Процедура заключается в обработке образца буфером для лизиса при двух температурах, которые могут быть достигнуты почти всеми термоблоками (20 мин при 42 ° C и 5 мин при 65 ° C). Затем следует амплификация гена SARS-CoV-2 N с помощью реакции LAMP, которая выполняется за 30 минут, и, наконец, обнаружение конкретных ампликонов с использованием системы Cas12a / crRNA, которое может быть достигнуто за 10 минут. Считывание результата может быть выполнено с помощью термоциклера в реальном времени или лампы синего света в непонятных условиях ().

Обсуждение

Вспышка COVID-19 стала одной из важнейших проблем общественного здравоохранения на глобальном уровне.В отсутствие одобренной вакцины раннее и надежное обнаружение вируса среди всего населения — наша лучшая стратегия сдерживания летальности COVID-19 и благоприятного насыщения. В настоящей работе мы разработали новый тест обнаружения SARS-CoV-2, который позволяет быстро обнаруживать транскрипт вирусного гена N после простой, быстрой и дешевой процедуры выделения РНК. Кроме того, технология LAMP позволяет проводить универсальный диагностический тест, который может быть выполнен с использованием любой водяной бани, способной нагреваться до 65 ° C, и может быть обнаружен в лучшем случае с помощью термоциклера в реальном времени, а также невооруженным глазом, если оборудование отсутствует.

В этой работе мы протестировали несколько методов обнаружения, чтобы разработать более универсальный и чувствительный диагностический тест на вирус COVID-19. Основываясь на флуоресцентных и колориметрических показаниях, мы обнаружили, что колориметрическая система является более универсальной и легко развертываемой стратегией, но имеет недостатки, заключающиеся в том, что в образцах с низким количеством копий изменение цвета трудно четко воспринимать, и ее чувствительность к образцам с плохой буферизацией. Однако детектирование флуоресценции в реальном времени дало более легко интерпретируемые результаты, но требует использования термоциклера для ПЦР в реальном времени, что практически невозможно получить за пределами нескольких объектов.Кроме того, чтобы повысить чувствительность нашего диагностического теста, мы оценили интеграцию LbCas12a для усиления сигнала, генерируемого реакцией LAMP. Однако полученные результаты показали, что увеличение флуоресценции из-за активности LbCas12a (из-за LAMP-ампликонов) имеет линейное поведение, которое усиливает больше LAMP-сигналов. Следовательно, добавление LbCas12a улучшает LOD, полученный только в результате реакции LAMP.

По сравнению с другими диагностическими технологиями, оцененными другими группами, наша система обнаружения SARS-CoV-2 превосходит почти все доступные в настоящее время диагностические системы с точки зрения скорости, поскольку используемый протокол инактивации сократил время извлечения РНК до 25 минут.Разработанной системе LAMP требуется всего 40 минут для получения результата, и если мы реализуем систему LbCas12a, мы добавим еще 10 минут к протоколу, намного меньше времени по сравнению с 4 часами, используемыми в протоколах CDC / ВОЗ (8, 9), и аналогичен другим протоколам LAMP (30–45 мин) (6, 10) или протоколам на основе Crispr, таким как CRISPR Trans Reporter с направленной ДНК-эндонуклеазой (DETECTR) (30 мин) или Specific High Sensitivity Enzymatic Reporter Unlocking (SHERLOCK) (58 мин), в этих методах используется аналогичный протокол выделения РНК (11).Однако, поскольку другие диагностические технологии используют дорогостоящий по времени протокол извлечения РНК, наш протокол быстрой инактивации для извлечения нуклеиновых кислот дает нам общее время 65–75 минут для получения результата, начиная с момента приема образца. Кроме того, протокол выделения РНК, необходимый для всех методов, может представлять риск заражения и заражения. В этом случае мы сокращаем обработку выборки, используя ее напрямую.

Важно отметить, что колориметрическая система LAMP имеет ряд преимуществ по сравнению с другими системами с точки зрения ее применимости.Температуры инкубации, используемые во всем протоколе, могут быть достигнуты с использованием общей водяной бани, а окончательные результаты теста могут быть легко получены путем визуального осмотра. Кроме того, наш опыт показал, что колориметрические мастер-миксы LAMP (с праймерами) можно хранить при 4 ° C до недели. Эти преимущества делают колориметрические LAMP-тесты многообещающей технологией для улучшения вирусной диагностики в полевых условиях, легко адаптируемой к потребностям врачей (3). Однако, поскольку колориметрическое считывание LAMP достигается за счет снижения pH, эти реакции чувствительны к образцам без хорошей буферной системы, что приводит к увеличению количества ложноотрицательных результатов.

Разработанная диагностическая система SARS-CoV-2 LAMP показала чувствительность 66 копий на мкл, что сопоставимо с уровнем детализации DETECTR (70–300 копий на мкл) (3) или SHERLOCK (10–100 копий на мкл). (11). И если мы используем систему LbCas12a, этот LOD улучшается до 16 копий на мкл. По сравнению с другими диагностическими методами, основанными на LAMP, наша система имеет аналогичную чувствительность, поскольку Zhang et al. Сообщили о чувствительности 24 копий / мкл (2, 11, 12), а Yu et al. сообщили о чувствительности 10 копий / мл (13), что делает эти колориметрические тесты почти такими же чувствительными, как qPCR.Однако протокол RT-qPCR (CDC / WHO) по-прежнему является наиболее чувствительным методом диагностики, предел обнаружения составляет около 1–3 копий на мкл (4, 8). Кроме того, значение LOD, достигнутое в нашей диагностической системе, показало хорошую способность обнаруживать вирус SARS-CoV-2 в образцах пациентов и показало те же результаты, что и система qRT-PCR в том же наборе. Кроме того, даже если LOD выше, чем у традиционного метода, этого достаточно для обнаружения инфекции в клинических образцах, в которых количество копий в среднем составляет 676 копий на мкл (12).Настоящий метод имеет то преимущество, что объединяет два анализа без экстракции РНК, что, на наш взгляд, дает более надежный результат, чем любой из них по отдельности, поскольку он более чувствителен и специфичен, сохраняя при этом определенные технические преимущества, полезные для использования в повседневной лаборатории. Например, недавно опубликованный Pang et al. В методе (14) для реакции используется та же пробирка, но требуется предварительная экстракция РНК и более высокий уровень манипуляций, поскольку каждая пробирка должна удерживать смесь Cas12 в крышке, что подвержено ошибкам при работе с несколькими образцами.Недавно опубликованный анализ Lalli et al. (15) не требует предварительного выделения РНК, но начинается со слюны, которая, по крайней мере, в наших руках, имеет проблемы с воспроизводимостью и специфичностью, поскольку мы обнаружили, что дополнительное использование Cas12a снижает количество ложноположительных результатов. Кроме того, их метод требует добавления протеиназы К или гуанидин-изотиоцианата, что увеличивает стоимость анализа. Наконец, с точки зрения специфичности система обнаружения SARS-Cov-2 LAMP, которую мы представляем, не показала амплификации в образцах, содержащих РНК человека, и в геномах других вирусов, вызывающих респираторные заболевания.Сравнение анализов приведено в.

Таблица 8

Сравнение последних методов обнаружения SARS-CoV2.

мин 916 cp / rxn
Наша работа Wang et al. (16) Панг и др. (14) Лалли и др. (15)
Методы RT-LAMP / Cas12a RT-LAMP / Cas12a RT-LAMP / Cas12a RT-LAMP
Время 40 мин 25 мин
LOD 330 cp / rxn (66 cp / мкл) 5 cp / мкл 150 cp / rxn (30 cp / мкл) 59
Клинические образцы 34 50 100 тампонов 30 слюна
Экстракция РНК Нет Да Да Нет 9162 Цветовая и флуоресцентная свет УФ-свет и мобильный телефон Колориметрия и флуоресценция
Цель Ген N S-ген Ген N и E Ген N и Orflab
Br ief description Мы используем HUDSON (25 мин) Обе реакции одновременно в отдельных пробирках и перемешивание последние 10 мин. Обе реакции в одной пробирке и в одно и то же время. Смесь LAMP на дне и смесь Cas12 на крышке для первой инкубации, затем они смешиваются и проводят вторую инкубацию. Аналогично Вангу без масла, но с другим временем и объемом Образцы инкубируют при двух температурах (65 ° / 15 мин и 95 ° / 5 мин) с последующей инкубацией в течение 25 мин.
Объемы 24 мкл RT-LAMP + 20 мкл Cas12 + 5 мкл образца 40 мкл RT-LAMP + 20 мкл Cas12 + 1 мкл образца 25 мкл RT-LAMP + 10 мкл Cas12 + 2-10 Образец мкл 20 мкл RT-LAMP + 3 мкл образца

В заключение, эти результаты означают, что система обнаружения SARS-CoV-2 LAMP показала среднюю чувствительность с точки зрения значения LOD, но с достаточной квалификацией для обнаружения вирус в образцах пациентов и с высокой специфичностью, которая не пересекается с человеческими транскриптомами или другими вирусными геномами.Система обнаружения SARS-CoV-2 LAMP предлагает быстрый, чувствительный и конкретный вариант с минимальными требованиями к обработке образцов или оборудованию для обнаружения SARS-CoV-2.

Заявление о доступности данных

Исходные материалы, представленные в исследовании, включены в статью / дополнительные материалы, дальнейшие запросы можно направлять соответствующим авторам.

Заявление об этике

Исследования с участием людей были рассмотрены и одобрены Комитетом по этике Instituto Nacional de Medicina Genómica.Пациенты / участники предоставили письменное информированное согласие на участие в этом исследовании.

Вклад авторов

AG-V, BR-Z, EM-G, AM-M и HO выполнили все эксперименты, включая анализ образцов. VM, IL и JM-Z координировали исследование. Статью написали AG-V, BR-Z, VM и JM-Z. AG-V, BR-Z, EM-G, VM и JM-Z проанализировали данные. Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось в отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Спасибо доктору Гизеле Себальос и доктору Магали Эспиноза за помощь и поддержку во время субклонирования плазмид. Спасибо CONACyT за специальное финансирование, сделавшее возможным этот проект. Мы благодарим доктора Густаво Рейес-Теран за его поддержку.

Сноски

Финансирование. Этот проект финансировался Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACyT), проект FORDECYT 03/2020.

Ссылки

1. Центр Дж. С. Х. С. Р. Глобальные случаи коронавируса COVID-19 Центром системных наук и инженерии (CSSE) на конференции Джона Хопкинса 2020.Балтимор: Центр Джона Хопкинса; (2020). [Google Scholar] 2. Мори Й., Нотоми Т. Петлевая изотермическая амплификация (LAMP): быстрый, точный и экономичный метод диагностики инфекционных заболеваний. J Infect Chemother. (2009) 15: 62–9. 10.1007 / s10156-009-0669-9 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 3. Nzelu CO, Kato H, Peters NC. Петлевая изотермическая амплификация (LAMP): передовая молекулярная методика обнаружения инфекции Leishmania в месте оказания медицинской помощи. PLoS Negl Trop Dis.(2019) 13: e0007698. 10.1371 / journal.pntd.0007698 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 4. Всемирная организация здоровья . Использование петлевой изотермической амплификации (TB-LAMP) для диагностики туберкулеза легких: руководство по политике. Женева: Всемирная организация здравоохранения; (2016). [Google Scholar] 5. Секи М., Килгор П.Е., Ким Э.Дж., Охниши М., Хаякава С., Ким Д.В. Петлевые методы изотермической амплификации для диагностики бактериального менингита. Фронт Педиатр. (2018) 6:57. 10.3389 / фпед.2018.00057 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 6. Чжан Ю., Одивуор Н., Сюн Дж., Сун Л., Няруба РО, Вэй Х и др. . Быстрое молекулярное определение РНК вируса SARS-CoV-2 (COVID-19) с помощью колориметрической лампы LAMP. medRxiv [препринт]. (2020). 10.1101 / 2020.02.26.20028373 [CrossRef] [Google Scholar] 7. Broughton JP, Deng X, Yu G, Fasching CL, Singh J, Streithorst J, et al. . Обнаружение SARS-CoV-2 на основе CRISPR-Cas12. Nat Biotechnol. (2020) 38: 870–4. 10.1038 / s41587-020-0513-4 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 8.Центры по контролю и профилактике заболеваний . CDC 2019-Новый коронавирус (2019-nCoV) Центры диагностики RT-PCR в реальном времени для контроля и профилактики заболеваний. Атлантла: Центры по контролю и профилактике заболеваний; (2020). [Google Scholar] 9. Чинг Л., Чанг С.П., Неруркар В.Р. Специальная колонка COVID-19: принципы, лежащие в основе технологии обнаружения SARS-CoV-2, причины COVID-19. Гавайи J Health Soc Welf. (2020) 79: 136–142. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 10. Хуан В.Е., Лим Б., Сюй С-С, Сюн Д., Ву В., Юй и др.. RT-LAMP для быстрой диагностики коронавируса SARS-CoV-2. Microb Biotechnol. (2020) 13: 950–61. 10.1111 / 1751-7915.13586 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 11. Zhang F, Abudayyeh OO, Gootenberg JS. Протокол обнаружения COVID-19 с помощью диагностики CRISPR. Vol. 8. Кембридж, Массачусетс: Институт Броуда; (2020). [Google Scholar] 12. Вельфель Р., Корман В.М., Гуггемос В., Сейлмайер М., Занге С., Мюллер М.А. и др. . Вирусологическая оценка госпитализированных пациентов с COVID-2019. Природа.(2020) 581: 465–9. 10.1038 / s41586-020-2196-x [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 13. Yu L, Wu S, Hao X, Li X, Liu X, Ye S и др. . Быстрое колориметрическое обнаружение коронавируса COVID-19 с использованием диагностической платформы с обратной транскрипцией изотермической амплификации (RT-LAMP): iLACO. medRxiv [препринт]. (2020). 10.1101 / 2020.02.20.20025874 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 14. Панг Б., Сюй Дж., Лю И, Пэн Х, Фэн В., Цао И и др. . Изотермическая амплификация и визуализация окружающей среды в одной пробирке для обнаружения SARS-CoV-2 с использованием петлевой амплификации и технологии CRISPR.Anal Chem. (2020) 92: 16204–12. 10.1021 / acs.analchem.0c04047 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 15. Лалли MA, Langmade JS, Chen X, Fronick CC, Sawyer CS, Burcea LC и др. . Быстрое обнаружение SARS-CoV-2 из слюны без извлечения путем колориметрической изотермической амплификации, опосредованной петлей обратной транскрипции. Clin Chem. (2020) 62. 10.1093 / Clinchem / hvaa267 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 16. Ван Р, Цянь Ц., Панг И, Ли М., Ян И, Ма Х и др. . opvCRISPR: Визуальная платформа RT-LAMP-CRISPR с одним горшком для обнаружения SARS-cov-2.Biosens Bioelectron. (2021) 172: 112766. 10.1016 / j.bios.2020.112766 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

Диагностический генетический тест на COVID-19 (мобильный)

Обработка образцов — один из наиболее важных аспектов в создании точных и надежных результаты лаборатории. Многие переменные, такие как соотношение антикоагулянтов, время и температура хранения, а также поверхность контейнеров и компонентов чертежа, могут повлиять на результаты теста.

Machaon Diagnostics следует и рекомендует использовать третье издание руководства Национального комитета по клиническим лабораторным стандартам (NCCLS) h31-A3: Сбор, транспортировка и обработка образцов крови для тестирования коагуляции и общих показателей коагуляции.

По всем вопросам доставки обращайтесь в лабораторию

Коллекция образцов

Замороженная цитратная плазма
Замороженная цитратная плазма — образец выбора для анализов свертывания и некоторых тестов ELISA. Антикоагулянт, используемый для этих анализов, составляет 105-109 ммоль / л, 3,13-3,2% дигидратной формы тринатрийцитрата (Na 3 C 6 H 5 O 7 2H 2 O), с буферизацией или без буферизации.

Пациентам со значениями гематокрита выше 55% следует скорректировать конечную концентрацию цитрата с помощью следующего уравнения:

X = (100 — PCV) / (595 — PCV) Объем WB

Где X — объем цитрата, необходимый для приготовления объема цельной крови (объем WB) от пациента с определенным процентным объемом упакованных клеток (PCV).

Следуйте приведенным ниже рекомендациям по отбору образцов цитратной плазмы.

  • Обязательно соотношение антикоагулянта и цельной крови 1: 9
  • Кровь по возможности следует вводить непосредственно в антикоагулянт
  • Набранные шприцы следует добавить к антикоагулянту в течение 1 минуты
  • Для розыгрыша шприца не должно быть больше шприца объемом 20 мл
  • Для заборов шприцев предпочтительнее использовать два шприца
  • Забор для коагуляции должен выполняться во 2-й или 3-й пробирке
  • Следует избегать извлечения катетера или по рекомендации лечащего врача
  • Все пробирки следует перевернуть не менее 4 раз, чтобы обеспечить надлежащее перемешивание
  • Подходящие иглы калибра от 19 до 22 для анализа коагуляции и тромбоцитов
  • Бесклеточная плазма должна содержать менее 10 000 тромбоцитов / мкл
  • Центрифугирование следует проводить при 1500 × g в течение 15 или более минут
  • Аликвоты замораживают (<= -20ºC), чтобы минимизировать деградацию фактора
  • Образцы отправляются замороженными на сухом льду (-78.5ºC)

Замороженная сыворотка
Замороженная сыворотка является предпочтительным образцом для большинства тестов на определение иммуноглобулинов и многих тестов на основе ELISA. Цельную кровь набирают в стеклянную или пластиковую пробирку, возможно, содержащую активатор. Пожалуйста, следуйте инструкциям производителя труб по обращению с трубками и их обработке.

Следуйте приведенным ниже рекомендациям по отбору образцов сыворотки.

  • Пластиковые пробирки с активатором следует перевернуть не менее 4 раз
  • Стеклянные пробирки без активатора необходимо свернуть на 2 часа при комнатной температуре
  • Подходящие калибры игл от 19 до 22 для тестов на основе сыворотки
  • Центрифугирование следует проводить при 1500 × g в течение 15 или более минут
  • Аликвоты замораживают (<= -20ºC) перед отправкой и отправляют на сухом льду (-78.5ºC)

Цельная кровь с ЭДТА
Цельная кровь с антикоагулянтом ЭДТА является образцом выбора для молекулярно-генетических тестов.

Пожалуйста, следуйте перечисленным предложениям по сбору генетических образцов.

  • Кровь по возможности следует вводить непосредственно в антикоагулянт
  • Извлеченная ДНК приемлема, если получена из лабораторий, сертифицированных CLIA
  • Это должна быть закрытая система вытяжки для предотвращения загрязнения
  • Все пробирки следует перевернуть не менее 4 раз, чтобы обеспечить надлежащее перемешивание
  • Подходящие калибры игл от 19 до 22 для предотвращения лизиса клеток
  • Для генетических анализов необходимо минимум 2 мл цельной крови
  • Для этого типа образца обработка не требуется
  • Отправляйте образцы этого типа при комнатной температуре

Аликвотирование образцов
Отправка нескольких аликвот (плазмы или сыворотки) для тестирования является важным аспектом тестов на сгусток, хромогенных и ELISA.Для большинства наших анализов требуются аликвоты по 1 мл. Перед отправкой их следует заморозить в морозильной камере с температурой <= -20 ° C или ниже. Пробирки следует поместить в штатив, чтобы образцы должным образом заморозились в основании пробирки. Замораживание должно произойти в течение 1 часа с момента розыгрыша. Пожалуйста, обращайтесь к предпочтительному количеству аликвот при отправке образцов.

Доставка

Отгрузка — важный аспект клинических испытаний. Пожалуйста, следуйте приведенным ниже инструкциям, чтобы упростить доставку в лабораторию.

Местные грузоотправители
Компания Machaon Diagnostics заключает договор с Medical Couriers, Inc. (MCI). которые обслуживают весь район залива Сан-Франциско и прилегающие районы. MCI имеет парк специально обученных водителей, которые посетят вашу лабораторию, клинику или офис в определенное время. Курьеры перевозят сухой лед, холодные пакеты и контейнеры комнатной температуры для получения всех типов образцов.

С

Medical Couriers, Inc. можно позвонить по телефону для индивидуальных запросов о доставке по указанному ниже номеру.

Medical Couriers, Inc.
(800) -652-1147

Поместите подготовленные образцы и бланки заказа в транспортную сумку с надписью Machaon и типом образца на четком и видном месте.

Грузоотправители, выезжающие за границу
Соберите следующие предметы:

  • Форма тестового заказа
  • Упаковочный материал или газета
  • Контейнер из пенопласта, возможно с картонной коробкой
  • Лента упаковочная
  • Авианакладная за ночные отгрузки
  • Этикетка ORM-A для грузов с сухим льдом (UN1845)
  • Сухой лед (-78.5ºC) достаточно для транзитного времени (5 фунтов в день)
  • Образцы в сумке для транспортировки биологически опасных образцов

Упаковка
Поместите пакет для биологических опасностей, содержащий образцы и бланк заказа на испытание, в контейнер из пенополистирола, а затем сухой лед. Заполните оставшееся пространство контейнера упаковочным материалом и заклейте упаковочной лентой. Наклейте заполненный авиаконструктор и этикетки с сухим льдом на внешней стороне контейнера на видном месте. Позвоните своему предпочитаемому ночному курьеру, чтобы запросить доставку или разместить контейнер в специально отведенном месте.

По всем вопросам доставки обращайтесь в лабораторию

Подкасты

Образование

Антифосфолипидный синдром: критерии, некритерии и тройное положительное тестирование — видео с доктором Брэдом Льюисом и доктором Sciascia.

Путеводитель по видеоконтенту:

00:24 — Введение (Почему мы должны заботиться о диагностике aHUS и TTP)
1:00 — Что такое микроангиопатическая гемолитическая анемия (MAHA)?
1:16 — Мазок крови с шистоцитами
1:40 — Синтез белка фон Виллебранда
02:09 — Патофизиология ADAMTS-13 и TTP
02:43 — Как интерпретировать тестирование активности ADAMTS-13 и преимущества выполнения активности ADAMTS-13 тестирование с помощью Machaon Dx
03:48 — Использование тестирования ADAMTS-13 для диагностики «оккультного» TTP
04:40 — Определение входа или выхода aHUS с помощью тестирования активности ADAMTS-13
05:20 — Обмен плазмы для пациентов с aHUS
05: 57 — Каскад комплемента и патофизиология aHUS
08:04 — Пациенты с aHUS реагируют на терапию экулизумабом
08:45 — В отличие от TTP, aHUS имеет триггеры в 70% случаев
09:26 — aHUS — это мультисистемное микрососудистое заболевание (вызванное aHUS повреждение органов)
10:09 — презентация aHUS
11:41 — Можно ли клинически дифференцировать TTP и aHUS?
12:15 — 5 причин, почему вы должны заботиться о генотипировании пациентов с aHUS
14:17 — Преимущества проведения генетического тестирования aHUS с помощью Machaon Dx
14:52 — Изюминка: алгоритм диагностики aHUS и TTP

Публикации

Стромснесс Б.и другие. Интерпретация врачом сомнительных результатов генетического тестирования aHUS сильно различается и часто расходится с лабораторными представлениями. Дж Клин Аферез . 2019; (аннотация П-82).

Эро, депутат, Каин, Дж. С., изобретатели; Machaon Diagnostics, Inc., правопреемник. 2018.12.18. Метод диагностики комплемент-опосредованных тромботических микроангиопатий. Патент США US 10,155,983.

Tao J. et al. Редкий случай синдрома Альпорта, атипичного гемолитико-уремического синдрома и паучиммунного серповидного гломерулонефрита. BMC Nephrology . 2018; 19: 355.

Kain J. et al. Дополнительные гены, связанные с атипичным гемолитико-уремическим синдромом. ASN 2018 Реферат TH-PO713 . 2018; (абстрактный).

Switala L. et al. Нарушения фактора комплемента выявляются у пациентов с подозрением на гепарин-индуцированную тромбоцитопению (HIT), но не у пациентов с тромботической тромбоцитопенией пурпурой (TTP). ISLH 2017 Тезисы докладов . 2017; (абстрактный).

Ipe T. et al. Чрезвычайно редкая мутация сайта сплайсинга в гене фактора комплемента I у пациента с атипичным гемолитико-уремическим синдромом. Дж Клин Аферез . 2017; 32 (6): 584-588.

Alge J. et al. Гемолитико-уремический синдром как проявление мутации WT1 и синдрома Дениса-Драша: клинический случай. БМК Нефрология . 2017; 18 (1): 243.

Zhang K. et al. Атипичный гемолитико-уремический синдром: краткий обзор. Гематологические отчеты . 2017; 9 (2): 7053.

Jensen G. et al. Потребление наттокиназы связано со снижением артериального давления и фактора фон Виллебранда, маркера сердечно-сосудистого риска: результат рандомизированного двойного слепого плацебо-контролируемого многоцентрового клинического исследования в Северной Америке. Встроенный контроль артериального давления . 2016; 9: 95-104.

Stromsness B. et al. Воспринимаемая клиническая полезность тестирования ADAMTS-13 быстро уменьшается, когда время выполнения превышает два дня. Инт Дж. Лаборатория Гематол . 2015; (абстрактный).

Ero M. et al. Обнаружение нового варианта важно при попытке генетически подтвердить клинический диагноз комплемент-опосредованной тромботической микроангиопатии (ТМА). Дж Клин Аферез . 2015; (аннотация О-09).

Harbert J. et al. Подавляющее действие рыбьего жира на образование тромбина, связанное с тромбоцитами, по данным калиброванной автоматической тромбограммы: исследование in vitro. Int Soc Thromb Hemost 2014; (аннотация 604).

Ero M. et al. Влияние телаванцина на протромбиновое время и активированное частичное тромбопластиновое время, как определено с помощью коагулометров в месте оказания медицинской помощи. Дж Тромб Тромболизис . 2013; 38 (2): 235-240.

Beattie DT. И другие. Исследование in vitro сердечно-сосудистых эффектов селективных агонистов рецепторов 5-HT4, Велусетраг и TD-8954. Дж Тромб Тромболизис . Сосудистая фармакология. 2013. 58: 150–156.

Ero M. et al. Пилотное исследование сывороточной фармакокинетики наттокиназы у людей после приема однократной пероральной суточной дозы. Альтернативные методы лечения . 2013; 19 (3): 18-21.

Хиггинс Д. и соавт. Неспособность тегасерода влиять на агрегацию тромбоцитов и тонус коронарных артерий в сверхтерапевтических концентрациях. Архив фармакологии . 2012; 385 (1): 103-9.

Ng C. et al.Пероральная биодоступность наттокиназы (NSK-SD). Ам Дж. Клин Патол . 2010; 134 (доп.): 11.

Lakshmi P. et al. Флавококсид, противовоспалительный агент растительного происхождения, не влияет на коагуляцию и не взаимодействует с антикоагулянтной терапией. Adv Ther . 2010; 27 (7): 1-12.

Jeske WP. и другие. Выделение и характеристика гепарина из шкур тунца. Clin Appl Thromb Hemost . 2007 Апрель; 12 (2): 137-45.

Fareed D. et al. Уровни оксида азота повышаются у пациентов с гиперкоагуляцией, связанной со злокачественными новообразованиями. Int J Lab Гематол . 2005; (абстрактный).

Jeske WP. и другие. Обзор моделей венозного тромбоза. Методы Мол Мед . 2004; 93: 221-37.

Sahud et al. Ингибитор протеазы, расщепляющей фактор фон Виллебранда, у пациента с тромботической тромбоцитопенической пурпурой, связанной с синдромом иммунодефицита человека. Br J Haematol . 2002; 116 (4): 909-911.

Fenton JW. и другие. Статиновые препараты и диетические изопреноиды подавляют пренилирование белков при передаче сигнала и являются антитромботическими и протромболитическими агентами. Биохимия . 2002; 67 (1): 85-91.

Ero M. et al. Сравнительные эффекты новой смеси сульфатированных пентаманнановых олигосахаридов (PI-88), гепарина и родственных агентов на индуцированную тканевым фактором активацию тромбоцитов и профиль агрегации в цельной крови. Тромб Хемост . 2001; (аннотация 6260).

Ero M. et al. Антитромбоцитарный препарат, тиклопидин, ингибирует индуцированные гепарином тромбоцитопенические реакции, измеренные агрегометрией тромбоцитов и высвобождением 14С серотонина. Тромбогемостаз . 1997; (абстрактный).

Machaon Diagnostics — клиническая справочная лаборатория, специализирующаяся на диагностике и мониторинге коагуляции, тромбоцитов, редких заболеваний и генетики. Что делает нас уникальными, так это наша способность обеспечить высококачественное тестирование на заказ с непревзойденной скоростью .

  • Наша миссия спасти больше жизней с помощью лабораторных тестов .

С 2003 года мы превратились в команду клиницистов, ученых, консультантов и технологов, обладающих более чем 400-летним опытом в области лабораторной медицины.

Наши области клинической экспертизы включают: Генетика редких заболеваний, расширенный гемостаз (тромбоциты и коагуляция), нарушения комплемента, нефрология, гематология / онкология, офтальмология, кардиология, иммунология и медицинское оборудование.

Наше эзотерическое и дополнительное рутинное меню тестирования применимо к широкому спектру заболеваний и клинических ситуаций и, следовательно, привлекает внимание как национальных, так и международных клиентов. В число наших клиентов входят университетские медицинские центры, сети систем здравоохранения, общественные больницы, коммерческие и исследовательские лаборатории, кабинеты врачей, биотехнологические фирмы и фармацевтические компании любого размера.

Услуги CRO

Machaon Diagnostics предоставляет комплексные решения quick и для компаний, нуждающихся в услугах клинических испытаний, контрактных исследованиях и независимом подтверждении маркетинговых требований. Мы проводим исследования фармацевтических препаратов и медицинских устройств с 2003 года. Дизайн, набор субъектов, сбор / хранение образцов, тестирование, статистический анализ, отчеты об исследованиях и подготовка рукописей — все это входит в наши комплексные услуги.У нас есть обширная база данных хорошо охарактеризованных добровольцев, что позволяет нам завершить некоторые клинические испытания, одобренные IRB, всего за 5 недель. Наша тематическая база данных включает в себя нормальных взрослых, редкие заболевания, повышенный риск сердечно-сосудистых заболеваний, высокое кровяное давление, метаболический синдром и другие группы населения. Мы часто сотрудничаем с нашими более крупными партнерами по CRO, чтобы помочь в глобальных клинических испытаниях.

Исследования и разработки

Machaon Diagnostics — крупнейшая независимая специализированная лаборатория коагуляции в США.Мы — частная компания, в которой работают доктора медицины, доктора наук, лицензированные ученые-клинические лаборатории (CLS) и медицинские технологи.

Как клиническая лаборатория, мы обеспечиваем уникальную среду тестирования для оценки тромботического и фибринолитического потенциала. Фармацевтические, приборные и биотехнологические соединения и материалы можно изучать в рамках установленных, проверенных и контролируемых клинических анализов с проверенными контрольными диапазонами. Наши клинические испытания дополнительно контролируются в рамках наших политик и процедур обеспечения качества и проверки квалификации.Все тесты можно модифицировать или переконструировать для анализа наилучшего соответствия.

Лаборатория Machaon Diagnostics расположена на территории медицинского центра в Окленде, штат Калифорния, со второй лабораторией в Новом Орлеане, штат Луизиана. Наши ученые опубликованы в области лабораторной медицины и увлечены ею.

Разработка анализа

Наши сотрудники имеют большой опыт разработки уникальных систем тестирования или применения надлежащих систем тестирования, чтобы быстро и точно ответить на вопросы клинических испытаний.

Индивидуальные анализы , от ELISA до NGS, от Sanger до проточной цитометрии, от TEG до электрофореза, мы создаем индивидуальные анализы, чтобы дополнить наши уже существующие возможности тестирования, чтобы удовлетворить ваши потребности в тестировании.

Machaon Diagnostics — это лицензированная несколькими штатами, аккредитованная CLIA, аккредитованная Колледжем американских патологов (CAP) клиническая лаборатория, уполномоченная предоставлять клинические лабораторные услуги высокой сложности. Все лабораторные испытания контролируются в рамках нашей Программы обеспечения качества, и исследования предлагаются в условиях надлежащей лабораторной практики (GLP, 21CFR, часть 58) / EN 13612.

Обратитесь в лабораторию, чтобы узнать о любой из этих услуг.

Почему такое имя, Махаон?

Махаон (произносится «май-чай-он») — персонаж из «Илиады» Гомера (800 г. до н. Э.) И ключевая фигура в Троянской войне. Описанный как воин, хирург и целитель, Махаон был почитаем за спасение жизни Менелая, царя Спарты, мужа Елены и Филоктета, знаменитого вождя ахейцев. Под руководством царя Агамемнона Махаон спас этих и многих других воинов во время жестокой греческой и троянской войны.

Что нужно знать

Если вы читаете эту страницу, это, вероятно, означает, что ваш врач назначил вам тест на кровотечение или свертываемость и хотел бы, чтобы вы прошли этот тест в Machaon Diagnostics. Machaon Diagnostics — клиническая справочная лаборатория, специализирующаяся на тестировании на кровотечение и свертываемость, одна из немногих независимых лабораторий свертывания крови в стране. Мы проводим очень специфические, уникальные анализы крови, которые часто имеют решающее значение для помощи врачам в выборе правильного курса лечения.

Machaon Diagnostics предоставляет специализированные лабораторные тесты для больниц и врачей по всей стране и признан за скорость и качество наших тестов.

Важно знать, что ваша страховка может покрывать или не покрывать ваше тестирование. У нас есть большой опыт работы с пациентами, чтобы обеспечить им необходимое тестирование, и мы будем работать с вами, чтобы помочь найти решение, если ваша страховка не покрывает тестирование, которое мы предоставим.

Если вы едете в Махаон на тест, вам нужно иметь при себе следующие вещи:

  • Приказ лаборатории врача
  • Ваша страховая информация
  • Ваш идентификатор
  • Список текущих лекарств
  • Если вы собираетесь поступить из-за агрегации тромбоцитов, помните, что перед этим тестом вы должны голодать.

Machaon Diagnostics была основана в 2003 году и является лицензированной в Калифорнии, аккредитованной CLIA, клинической лабораторией, аккредитованной Колледжем американских патологов (CAP), уполномоченной предоставлять клинические лабораторные услуги высокой сложности. Все лабораторные испытания контролируются в рамках нашей Программы обеспечения качества, и исследования предлагаются в условиях надлежащей лабораторной практики (GLP, 21CFR, часть 58) / EN 13612.

При возникновении вопросов обращайтесь в лабораторию.

WarmStart® LAMP Kit (ДНК и РНК)


Набор WarmStart LAMP (ДНК и РНК) разработан для обеспечения простого одноэтапного решения для петлевой изотермической амплификации (LAMP) ДНК или РНК (RT- LAMP) целей.LAMP и RT-LAMP — это обычно используемые методы изотермической амплификации, которые обеспечивают быстрое обнаружение целевой нуклеиновой кислоты с использованием LAMP-специфических праймеров (поставляемых пользователем) и ДНК-полимеразы с замещением цепи. В этот набор входит смесь WarmStart LAMP 2X Master Mix, которая содержит смесь ДНК-полимеразы Bst 2.0 WarmStart и обратной транскриптазы WarmStart RTx в оптимизированном буферном растворе LAMP. Как Bst 2.0 WarmStart ДНК-полимераза, так и обратная транскриптаза WarmStart RTx были разработаны для повышения эффективности реакций LAMP и RT-LAMP.Также поставляется флуоресцентный краситель для измерения флуоресценции LAMP в реальном времени. Набор WarmStart LAMP Kit совместим с несколькими методами обнаружения, включая определение мутности, обнаружение флуоресценции в реальном времени (при использовании с флуоресцентным красителем LAMP) и визуализацию конечной точки.

Набор NEB WarmStart LAMP (ДНК и РНК) совместим с несколькими методами обнаружения.


Набор NEB WarmStart LAMP (ДНК и РНК) включает отдельный флуоресцентный краситель для измерения флуоресценции в реальном времени.В качестве альтернативы обнаружение может быть выполнено путем обнаружения мутности или визуализации конечной точки.

Набор NEB WarmStart LAMP (ДНК и РНК) обеспечивает скорость и высокую чувствительность


РНК-мишень (HMBS2) была амплифицирована из общей РНК Jurkat с использованием набора WarmStart LAMP Kit и OptiGene Master Mix (ISO-001). Реакции проводили при 65 ° C в течение 74 минут на термоциклере реального времени (Bio-Rad CFX96) в трех экземплярах. Время до получения результата устанавливается как время, когда флуоресценция пересекает порог 10% от максимальной флуоресценции.Комплект NEB WarmStart LAMP Kit обеспечивает более быстрое и надежное обнаружение по сравнению с OptiGene Master Mix.

Набор NEB WarmStart LAMP (ДНК и РНК) обеспечивает быстрые результаты LAMP / RT-LAMP


Эксперименты были разработаны для амплификации ДНК-мишени (BRCAb) и РНК-мишени (HMBS2) с помощью LAMP или RT-LAMP, соответственно . Реакционную смесь объемом 25 мкл, содержащую 10 нг ДНК HeLa или 5 нг общей РНК Jurkat, 1X Master Mix, 1X праймеры LAMP и флуоресцентный краситель, инкубировали на приборе Bio-Rad CFX98 при 65 ° C в течение 75 минут.Lucigen® OmniAmp® RNA & DNA Kit и OptiGene Isothermal Master Mix (ISO-001) использовали в соответствии с рекомендациями производителей.

NEB WarmStart LAMP Kit (ДНК и РНК) обеспечивает специфическую амплификацию для нескольких видов / мишеней

НАБОР ПРАЙМЕРА

ШАБЛОН ДНК

HeLa
ДНК

Лайм
ДНК

Б.малайский
ДНК

E. coli
ДНК

C. elegans
ДНК

BRCAb (человек)

+

CFTR (человек)

+

LymO (Лайм)

+

BmHhal ( Б.малайский )

+

ДНК ( E. coli)

+

Lec10b ( С.elegans )

+

Lec6 ( C. elegans )

+

В каждой отдельной реакции добавляли несколько матриц гДНК вместе с праймерами, специфичными для мишени только у одного вида.Реакции инкубировали при 65 ° C в течение 74 минут на термоциклере (Bio-Rad CFX96) в трех экземплярах. Положительные результаты (+) наблюдались только в ожидаемых комбинациях вид / мишень, что свидетельствует о высокой специфичности реакций WarmStart LAMP.

Компоненты комплекта

В комплект поставки данного продукта входят следующие реагенты:

NEB # Название компонента Компонент № Хранится при (° C) Сумма Концентрация
Категории продукта:
Продукты изотермического усиления и вытеснения прядей
Приложения:
Изотермическое усиление, опосредованное петлей,
Изотермическое усиление

(PDF) RT ‐ LAMP для быстрой диагностики коронавируса SARS ‐ CoV ‐ 2

Обычная RT-qPCR для SARS-CoV-2

Коммерческий набор для RT-PCR 2019-nCoV (Shanghai ZJ Bio-

Tech, China) был использован для определения того, являются ли образцы

положительными или отрицательными в отношении вируса SARS-CoV-2.в системе ПЦР в реальном времени ABI

7500 (Thermo Fisher Scienti ‑ fc

Inc., Уолтем, США) в соответствии с инструкциями производителя

. 25 мкл реакционной смеси содержали 5 мкл

РНК в качестве матрицы, 19 мкл фермента 2019-nCOV RT -PCR Buf-

, 1 мкл ферментной смеси RT-qPCR. Условия термоциклирования

составляли 10 минут при 45 ° C для обратной транскрипции,

3 минуты при 95 ° C для начальной активации ПЦР и 45 циклов

15 секунд при 95 ° C и 30 секунд при 58 ° C.

RT-LAMP для клинических образцов РНК

Анализы RT-LAMP на клинических образцах проводили в

предварительно смешанных тестовых наборах. Каждый тестовый набор состоит из трех пробирок

,

№1, №2 и №3, которые содержат праймеры актина O-117, N-15 и человеческий b-

соответственно (таблица 1). Три пробирки

,

были сначала заполнены 5 мкл воды, не содержащей РНКазы (Sigma-

Aldrich), 12,5 мкл колориметрической лампы WarmStart 29

Master Mix (New England Biolabs, Великобритания) и 2.5 мкл

10х грунтовочная смесь. Тестовые наборы были сначала изготовлены в ОСКАР

и доставлены в Народную больницу Шэньчжэня Луоху

в ящике для льда. Для обнаружения вируса SARS-CoV-2

5 мкл экстрагированной РНК из каждого образца пациента

добавляли в пробирки №1, №2 и №3 соответственно. Тестовый набор

инкубировали при 65 ° C в течение 30 мин.

Благодарности

Z.F.C и W.E.H выражают благодарность за финансовую поддержку

порт

Оксфордского центра перспективных исследований

(OSCAR) Оксфордского университета в Сучжоу.

Конфликт интересов

Не заявлено.

Ссылки

Беме, К.С., Набета, П., Хеностроза, Г., Ракиб, Р., Рахим,

,

З., Герхардт, М. и др. (2007) Практическая осуществимость использования петлевой изотермической амплификации

для диагностики туберкулеза легких

в микроскопических центрах развивающихся стран

. J Clin Microbiol 45: 1936–1940.

Цуй, Дж., Ли, Ф., и Ши, З.Л. (2019) Происхождение и эволюция

патогенных коронавирусов

.Nat Rev Microbiol 17: 181–192.

Drosten, C., Gottig, S., Schilling, S., Asper, M., Panning, M.,

Schmitz, H., and Gunther, S. (2002) Быстрое обнаружение и количественное определение РНК

вирусов Эбола и Марбург, вируса

Ласса, вируса крымско-конголезской геморрагической лихорадки, вируса лихорадки долины Рифт

, вируса Денге и вируса желтой лихорадки

с помощью ПЦР с обратной транскрипцией в реальном времени. J Clin Microbiol

40: 2323–2330.

Эспи, М.J., Uhl, J.R., Sloan, L.M., Buckwalter, S.P., Jones,

M.F., Vetter, E.A., et al. (2006) ПЦР в реальном времени в клинической микробиологии

: Приложения для рутинных лабораторных исследований.

Clin Microbiol Rev 19: 165.

Хси, К., Маг, П.Л., Чордас, А.Т., Эйзенштейн, М., и

Сох, Х.Т. (2014) Одновременное устранение переходящего загрязнения

и обнаружение ДНК с помощью урацил-ДНК-гли-

козилазы, опосредованной петлей изотермического катиона амплификации

(UDG-LAMP).Chem Commun 50: 3747–3749.

Huang, W.E., Wang, H., Zheng, H.J., Huang, L.F., Singer,

,

A.C., Thompson, I., and Whiteley, A.S. (2005) Chromoso-

локализованных слияний генов, сконструированных в Acinetobacter

sp. ADP1 для обнаружения салицилата. Environ Microbiol

7: 1339–1348.

Law, J.W.F., Ab Mutalib, N..S., Chan, K.G., and Lee, L.H.

(2015) Быстрые методы обнаружения бактериальных патогенов пищевого происхождения

: принципы, применения, преимущества и ограничения

.Front Microbiol 5: 770.

Ma, CP, Wang, FX, Wang, XD, Han, LZ, Jing, H.,

Zhang, H., and Shi, C. (2017) Новый метод контроля

переходящее загрязнение в изотермическом катионе амплификации нуклеиновой кислоты

. Chem Commun 53: 10696-10699.

Маккей И.М., Арден К.Е. и Ницше А. (2002)

ПЦР в реальном времени в вирусологии. Nucleic Acids Res 30: 1292–1305.

Menachery, V.D., Yount, B.L., Debbink, K., Agnihothram, S.,

Gralinski, L.E., Plante, J.A., et al. (2015) Кластер циркулирующих коронавирусов летучих мышей, похожий на SARS

, показывает потенциал для появления

человека. Nat Med 21: 1508.

Mori, Y., and Notomi, T. (2009) Петлевая изотермическая амплификация

(LAMP): быстрый, точный и экономичный метод

диагностики инфекционных заболеваний. J Infect Che-

мать 15: 62–69.

Nagamine, K., Hase, T., and Notomi, T. (2002) Ускорение реакции

путем изотермической амплификации, опосредованной петлей, с использованием праймеров для петель

.Зонды клеток Mol 16: 223–229.

Notomi, T., Okayama, H., Masubuchi, H., Yonekawa, T., Watan-

abe, K., Amino, N., and Hase, T. (2000) Loop-mediated

isothermal амплификация ДНК. Nucleic Acids Res 28: e63.

Пул, Си.Б., Ли, З.Р., Альхассан, А., Гелиг, Д., Дисбург, С.,

Таннер, Н.А., и др. (2017) Колориметрические тесты для диагностики

филариальной инфекции и эпиднадзор за переносчиками с использованием неинтегрированного

структурированного катиона нуклеиновой кислоты, опосредованного петлей изотермической амплификации

(NINA-LAMP).PLoS ONE 12: e0169011.

Пун, Л.Л.М., Люн, C.S.W., Чан, К.Х., Ли, Дж.Х.С.,

Юэн, К.Й., Гуан, Ю., и Пейрис, Дж.С.А. (2005) Обнаружение

вирусов гриппа А человека с помощью петлевой изотермической амплификации

. J Clin Microbiol 43: 427–430.

Ребоуд Дж., Сюй Г.Л., Гарретт А., Адрико М., Янг З.Г., Тука-

hebwa, E.M. и др. (2019) Микрофлюидика на бумажных носителях для ДНК

диагностики малярии в сельских общинах с низким уровнем ресурсов и недостаточным уровнем обеспеченности услугами —

общины.Proc Natl Acad Sci USA 116: 4834–4842.

Таннер, Н.А., Чжан, Ю.Х., и Эванс, Т.С. (2015) Visual

обнаружение изотермической амплификации нуклеиновых кислот с использованием

pH-чувствительных красителей. Биотехники 58: 59–68.

Thai, H.T.C., Le, M.Q., Vuong, C.D., Parida, M., Minekawa,

H., Notomi, T., et al. (2004) Разработка и оценка

нового метода петлевой изотермической амплификации

для быстрого обнаружения тяжелого острого респираторного синдрома

коронавируса.J Clin Microbiol 42: 1956–1961.

Томита Н., Мори Ю., Канда Х. и Нотоми Т. (2008)

Петлевая изотермическая амплификация (LAMP) гена

ª2020 Авторы. Microbial Biotechnology, опубликованная John Wiley & Sons Ltd и Обществом прикладной микробиологии.

Быстрое обнаружение вируса SARS-CoV-2 11

Информация для персонала: Самотестирование

В. Я участвую в исследовании SIREN, должен ли я по-прежнему посещать мои встречи для тестирования?
Да, пожалуйста, продолжайте участвовать в исследовании в обычном режиме.


В. Член семьи или друг нездоров, могу ли я предоставить им один из моих тестов?
Нет, тесты следует использовать только на том человеке, которому они были назначены.

В. Какие типы тестов мы внедряем?
В экспресс-качественном тесте на антиген Innova SARS-CoV-2 используется мазок, который соприкасается с ноздрей испытуемого. Тампон вставляется в трубку для экстракции с жидкостью для экстракции, а затем вращается и прижимается, чтобы убедиться, что образец из тампона попал в жидкость для экстракции (в этот момент тампон выбрасывается).Затем вы берете трубку для экстракции с крышкой сопла, капаете 2 капли жидкости для экстракции в лунку для образца картриджа устройства для тестирования LFD и ждете результатов на устройстве для тестирования.

В. Является ли тест обязательным или добровольным?

Тесты являются добровольными, но мы поощряем участие в тестировании коллег, работающих с пациентами, на благо своих коллег и пациентов.

В. Как часто следует проходить тестирование сотрудников?

Персонал должен проверять себя дважды в неделю каждые три-четыре дня на соответствие графику смен и требованиям к отпускам; например, среда и воскресенье или понедельник и четверг.Даже если вы работаете неполный рабочий день или сталкиваетесь с пациентом лишь частично, точность программы тестирования зависит от того, что вы проверяете себя два раза в неделю, поэтому, пожалуйста, проверяйте себя два раза в неделю, независимо от вашего рабочего графика или графика.

В. Что будет, если я получу положительный результат?

Если вы получите положительный результат теста, вам нужно будет самостоятельно изолировать , проинформировать своего непосредственного руководителя и следовать этим инструкциям, чтобы организовать последующий тест ПЦР, чтобы подтвердить свой результат и следовать советам группы по гигиене труда.

В. Что произойдет, если мой тест окажется отрицательным, но у меня есть симптомы коронавируса?

В. Что мне делать с использованными тестами?

Персонал может безопасно утилизировать образцы для испытаний вместе с обычными бытовыми отходами, но сначала следует вылить остатки буферного раствора.

В. На каком этапе Test and Trace сообщается о результате?

Когда результат подтверждающего теста ПЦР известен, и это положительный результат, результаты теста, как обычно, будут переданы в раздел «Тест и трассировка».

В. Если у меня положительный результат ПЦР-теста на COVID-19, когда мне следует снова начинать тесты на антиген латерального потока?

Сотрудник, получивший положительный результат, должен возобновить домашнее тестирование через 90 дней после получения положительного результата. Сотрудник должен будет связаться с командой по гигиене труда, чтобы отследить дату начала повторного тестирования.

В. Если я уже регулярно прохожу тестирование по существующим режимам, например, посещение специалистами домов престарелых, тестирование СИРЕНЫ, тестирование ПЦР в областях Уровня 3 и т. Д., Следует ли это заменить тестами на боковой поток?

Если персонал уже включен в другой режим тестирования, его не следует заменять тестами на боковой поток.Если они участвуют в исследованиях, в которых частота тестирования не еженедельно (например, ежемесячно), они должны проводить самотестирование LFD два раза в неделю. Например, сотрудники, участвующие в исследовании SIREN и проходящие тестирование каждые две недели, также должны участвовать в тестировании LFD два раза в неделю, если они работают с пациентами.

В. Как насчет тестирования LAMP? Я думал, что он используется для бессимптомного тестирования персонала?

Мы наращиваем потенциал тестирования LAMP в центрах патологии по всей стране.Когда это станет доступным, он будет использоваться для тестирования персонала.

В. Сколько тестов я получу?

Наборы для тестирования будут доставлены в коробках, содержащих следующее:

  • 25 пакетов из фольги, содержащих тестовый картридж и влагопоглотитель
  • 2 флакона 6 мл буферного раствора
  • 25 пробирок для экстракции и 25 крышек для пробирок
  • 25 стерилизованных тампонов для отбора проб
  • Инструкция по эксплуатации прибора (IFU)

В.Можно ли использовать эти тесты для пациентов?

ПЦР-тестов следует продолжать использовать для пациентов.

В. Могу ли я использовать тесты для членов моей семьи с симптомами?

Персонал и члены семьи, у которых есть симптомы, должны проходить тесты в обычном порядке либо через нашу команду по гигиене труда, либо через NHS Test and Track.

Остались вопросы?

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.


Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

  • В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
  • Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
  • Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
  • Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
  • Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.


Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Back to top